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肝外胆管癌(以下简称胆管癌)因发病率上升，早期诊断困难、切除率低、预后差而成为胆道外科的研究热点，而且我国大多数胆管癌病人无明确病因可寻。研究其发病因素，是制定合理的预防措施的关键所在。该病与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关性问题已成为重要的研究课题。本研究中，我们调查了中山医院一年间胆管癌新病例的病史资料、收集了胆管癌组织和肝活检组织、血清和胆汁标本，采用免疫组化、分子生物学和分子病理学技术、寻找胆管癌肝炎病毒感染的证据，探讨胆管与乙型和丙型肝炎病毒感染的相关性以及癌变的初步机理。 第一部分 胆管癌与乙型和丙型肝炎病毒感染的关系——医院病例对照研究 目的：探索胆管癌与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关性。 方法：采用医院病例-对照研究，选取中山医院2001年7月至2002年6月间收治的胆管癌病人为病例组、肝外胆管结石和肺部良性疾病为对照组，对病例和对照组病人就HBV和HCV感染率行回顾性调查。 结果：25例胆管癌血清HBsAg、抗-HBs、抗-HBe、和抗-HBc阳性率分别为40％、24％、32％和40％；在77例肝外胆管结石病人中则分别为3.9％、15.6％、5.2％、5.2％；在25例对照组病人中其值分别为8％、12％、4％、4％。总HBV感染率在三组病人中分别为72％、20.8％和20％。病例组与两对照组相比较，HBV总感染率存在极显著性差异，x~2值分别为22.06和13.33，P值均小于0.001，OR值分别为9.8036(95％CI=3.4926～27.5186)和10.2857(95％CI=2.7685～38.2146)。其中HBsAg阳性与疾病联系强度最大，病例和两对照x~2值分别为21.90和6.88，P值均小于0.001，是发病的危险因素之一；胆管癌病人HCV的感染率仅4％。 结论：胆管癌与HBV感染密切相关，可能是胆管癌发生的危险因素之一。中文摘要第二部分胆管癌组织中肝炎病毒抗原的免疫组化研究目的:探讨胆管癌与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关性。方法:对25例的胆管癌病人和20例胆管良性病变(对照组)病人用酶联免疫法检测血清抗一HBe、抗一HBc和抗一HCv，用电化学发光免疫测定法检测血清HBsAg、抗一HBs和HBeAg，用免疫组化ABC法测定组织中HBcAg和cP10，PAP法测定HBsAg。结果:250lJ胆管癌HBv血清标志物中HBsAg、抗一HBs、抗一HBe、抗一HBe的阳性率分别为40%、24%、32%、40%，HBV的总感染率为72%，血清抗一HCV阳性率为4%。癌组织中HBsAg和CP10的阳性率分别为52%和48%，而肝组织中二者的阳性率分别为87.5%和43.8%。结论:胆管癌与HBV感染有密切关系，而且近半数病人合并HCV重叠感染。第三部分胆管癌组织中乙型肝炎病毒DNA及基因的检测目的:采用分子生物学和分子病理学技术，从分子角度探讨胆管癌与HBv和HCV感染的相关性。方法:用PCR一EB法检测胆管癌组织、血清和胆汁中HBVS和X基因，用原位杂交法检测胆管癌组织中HBV DNA。结果:PCR一EB法检测胆管癌组织中HBVS和X基因的检出率分别为35% (7/20)和40%(8/20)，肝组织中则均为47 .1%(8/ 17)，良性胆管疾病胆管组织中HBVS和X基因检出率均为巧%(3/30)，肝组织中均为25%(5/25);胆管癌与对照组经才检验相比，无统计学差异。胆管癌组仅2(10%)例检出血清HBV DNA，胆汁中HBV DNA均阴性，而良性胆管疾病组则血清和胆汁中HBVDNA均阴性。原位杂交法检测HBV DNA，胆管癌和肝组织的阳性率分别为54.5%(6/11)和63.7%(7/11)，而在对照组中则分别为42.9%(3/7)和57.1% (4/7)，并且显示胆管癌/胆管和肝组织中所检出的HBV DNA信号均分布于细胞核内，聚集成团块状。结论:原位杂交和PCR一EB法均不如免疫组化敏感。原位杂交提示受染细胞内可能存在HBV DNA整合，病毒处于低复制或非复制状态。中文摘要第四部分胆管癌组织中乙型肝炎病毒X抗原的 检测及其意义目的:初步探讨HBV感染在胆管癌发生中的机理。方法:采用免疫组化ABC法检测组织中乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)。结果:25例胆管癌组织中HBxAg阳性率高达70.8%(17/24)，经犷检验后不仅与对照组(良性胆管组织)的阳性率ro.5%(2/19)存在极显著统计学差异(扩=15.“，P<0.005)，而且高于同组的肝组织的阳性率60%(9/15)。与HBsAg检测结果相比，HBxAg在癌组织中阳性率更趋升高，而在非癌组织中则趋于降低。HBxAg在癌组织中表达形式较为多样，存在胞浆为主型、核内型、核周型、核浆混合型和少量的核膜型等多种类型。结论:结果进一步证实HBV感染与胆管癌的关系，并且HBV感染后所表达的HBxAg可能参与了胆管癌的发生。本研究的许多证据提示，胆管癌与肝炎病毒感染相关