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蛋白质的相互作用是蛋白质执行其生物学功能的分子基础,研究蛋白质的相互作用,可以提高我们对代谢调控和生理过程的认识和理解。目前所采用的研究蛋白相互作用的方法包括酵母双杂交,GST pulldown和免疫共沉淀。然而,这些方法存在较高的假阳性,以及一些内在的相互作用不能被检测到的问题。因此,在现有研究条件下,我们利用腺病毒介导的 CRISPR/Cas9系统,结合最近新发展的研究蛋白相互作用的方法BioID,设计出一套在生理条件下研究蛋白相互作用的方法。简单来说,首先我们通过腺病毒介导的 CRISPR/Cas9系统对靶基因进行特异切割,造成双链断裂,触发细胞的同源修复机制,此时提供同源修复模板,模板左右各有1kb左右的同源区域,中间是BioID技术中核心分子BirA*基因,导致BirA*在同源修复机制下,定向敲入目的基因,从而构成融合基因,进而表达融合蛋白。BirA*可以生物素化目标蛋白附近的蛋白包括相互作用蛋白,通过亲和富集,借助生物质普的高分辨率和高灵敏度,从而鉴定出这些和目标蛋白相互作用的蛋白。本文首先以Cdh1/Fzr1(FZR1 fizzy/cell division cycle20 related1)为实验对象,验证该系统的可行性,Cdh1的已知底物可作为该系统的阳性对照。通过该方案,目前得到了BirA*的敲入细胞株,并在基因组水平验证敲入的正确性,以及在细胞水平初步验证了Cdh1-BirA*融合蛋白的表达。