裂殖壶菌SL1101的分离鉴定、诱变育种与发酵优化

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二十二碳六烯酸((Docosahexaenoic acid, DHA)是一种人体必需的极其重要的ω-3系列高度不饱和脂肪酸,具有促进婴幼儿脑部发育、保护视力、提高机体免疫能力等重要生理功能。商业用鱼油由于其DHA含量较低、资源有限和浓厚的鱼腥味等诸多不利因素,难以满足市场的需求,因此迫切需要开发安全、可靠的DHA新来源。裂殖壶菌是一种海洋真菌,不仅生长快、易于培养,而且DHA含量高,是一种极具有工业化前景的生产DHA的资源。本试验从海南东寨港红树林自然保护区采集不同植物的腐败落叶,从中分离得到40株裂殖壶菌属菌株,经检测,细胞总脂中DHA含量达30%以上菌株有20株,其中菌株SL1101细胞中DHA含量最高。通过形态和18S rDNA分子序列分析,鉴定菌株SL1101为裂殖壶菌。为获得高产DHA的裂殖壶菌,对菌株SL1101进行了紫外诱变育种,以菌浓度和DHA产量为指标,筛选得到一株DHA产量达到1.62g/L的突变株NL025,比初始菌株提高20.0%,且该突变株传代5次后仍保持较好的遗传稳定性。研究明确了突变株的最佳培养基组成。实验考察了碳源、氮源、金属离子和海水浓度对突变株NL025产DHA的影响,并通过正交实验对培养基碳氮源进行了优化。确定其最佳培养基组成为:9%葡萄糖、9%甘油、1.5%玉米粉和1%酵母粉,5mmol/L KCl,50%的陈海水。通过单因子实验对培养条件进行优化,确定最佳培养条件为:种龄48h,接种量8%,装液量80ml/500ml,初始pH值6.0,发酵温度25℃,培养时间4天。在此优化的培养基和培养条件下,突变株菌体干重可达20.6g/L, DHA产量为4.53g/L,比优化前提高了2.79倍。
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