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许氏平鲉(Sebastes schlegelii)是我国北方近海重要的岩礁性鱼类,由于具有广温广盐习性,可以自然越冬,也是我国北方沿海深水网箱养殖和增殖放流的适宜经济鱼种,但近年来其渔业资源减少严重,因此进行许氏平鲉人工繁育及良种选育具有重要的经济效益和社会效益。微卫星标记技术能够为许氏平鲉良种选育提供一定的技术支持,尤其是在分子标记辅助育种等方面。EST-SSR开发成本低,且在不同物种间具有一定的通用性,已经成为新型高效的开发微卫星标记的途径。许氏平鲉是卵胎生鱼类,具有一雌多雄的交配模式,对其选育系的遗传结构进行监测、分析其遗传多样性以及遗传分化情况具有十分重要的实践意义。本研究首次利用已发表的许氏平鲉EST序列进行EST-SSR标记开发,以期为许氏平鲉良种选育提供更多标记选择,同时选用8对扩增效果好、多态性丰富的微卫星引物对17个许氏平鲉快速生长选育系的遗传结构进行分析,以期为许氏平鲉种质资源保护、良种选育等工作提供支持。1、许氏平鲉EST-SSR标记的开发及通用性检测从NCBI公共数据库下载的1980条EST序列经拼接、SSR位点查找后,发现EST-SSR位点的发现率为9.14%,所有EST-SSR位点中完美型比例占到91.52%,其中,二碱基重复出现频率最高,以TG/CA基序最多,三碱基重复类型最多,四到六碱基所有重复类型皆出现一次。从中挑选、设计引物56对,46对引物能够有效扩增,18个位点具有多态性。18个多态位点共检测出70个等位基因,每个位点观测等位基因数(Na)为2~9,平均观测等位基因数为3.89;平均观测杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He)分别达到0.3037和0.3757;每个位点的平均多态信息含量(PIC)为0.3419,中高度多态位点比例达到50.00%;经Bonferroni校正后,仍有3个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.0028),但两两位点间不存在连锁不平衡现象。位点通用性检测结果显示,在朝鲜平鲉中除位点HJ606和HJ4183其余位点均能有效扩增,其中6个位点多态;在褐菖鲉中所有位点均能有效扩增,除位点HJ4215和HJ4286单态外其余位点均为多态;18个位点在朝鲜平鲉和褐菖鲉中的通用率分别是88.89%和100%,多态率为33.33%和88.89%。本研究开发的许氏平鲉EST-SSR标记多态性较高,在近缘物种中具有很高的通用性,可用于许氏平鲉系统进化分析、近缘种通用性检测以及分子标记育种等工作,并且为许氏平鲉良种选育以及构建更高密度遗传连锁图谱提供了更多的标记选择。2、17个许氏平鲉快速生长选育系的遗传结构分析本研究采用高分辨率的毛细管电泳进行SSR分型检测,8个标记在17个选育系中共检测到181个等位基因。选育系遗传多样性分析结果显示,17个选育系的平均观测等位基因数(Na)为6.0318,观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)均值分别达到了0.8417和0.7201,表明17个快速生长选育系的遗传多样性较高,仍具有很大的选育潜力。选育系遗传结构分析结果显示,遗传分化指数(Fst)在0.0750~0.3301之间,最小值存在于选育系FH(日照)和FB(青岛)之间,而最大值存在于SH(长岛子一代)和SE(荣成♀×青岛♂)之间,选育系间平均遗传分化指数达到0.2017,即20.17%的遗传变异来自于选育系间,而79.83%的遗传变异来自选育系内个体间差异,多重比较结果显示17个选育系间遗传分化均达到极显著水平。表明:本结果可为许氏平鲉下一步良种选育中的亲鱼配对策略提供理论依据。选育系间遗传距离的范围是0.0743~0.3268,平均值为0.1915,每个选育系随机选择10个个体进行个体的聚类分析,结果显示共形成5个主要节点,分别由几个选育系聚为一支,除个别个体散落外,17个选育系个体分别聚集在一起,表明选育系间遗传分化明显。本研究中17个许氏平鲉快速生长选育系的遗传多样性检测和遗传结构分析实现了对选育群体的遗传分化和遗传多样性程度监测,为制定下一步的选育计划提供数据支持。