狂犬病（Rabies virus,RABV）作为最古老的传染病之一,是由狂犬病病毒引起的几乎能感染所有哺乳动物的人畜共患病,其病死率几乎为100%,每年在世界范围导致约59,000人死亡,且绝大多数病例出现于发展中国家。疫苗接种是当前狂犬病防控的最有效手段,但目前应用的狂犬疫苗的免疫原性不高且免疫程序复杂,因此研制安全、高效的狂犬病新型疫苗对狂犬病的防控意义重大。狂犬病病毒样囊泡是一种由赛姆利基森林病毒的RNA复制子与狂犬病病毒糖蛋白共同组成的载体,能够诱导小鼠产生与狂犬病弱毒疫苗相当的针对狂犬病毒的特异性免疫反应。我们前期研究发现,白细胞介素7（Interleukin 7,IL-7）作为佐剂可以提高狂犬病弱毒疫苗的免疫原性,并降低致病性。因此,本研究在狂犬病病毒样囊泡的基础上,拟构建表达鼠源IL-7的重组狂犬病病毒样囊泡,并对其安全性和免疫原性开展研究,主要取得如下结果:我们首先通过反向遗传操作技术拯救表达增强绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,e GFP）的重组狂犬病病毒样囊泡,命名为rVLVs-e GFP-OptiG,通过荧光显微镜直接观察及间接免疫荧光的方法验证了外源蛋白e GFP可以被高效表达,且e GFP基因的插入不影响病毒样囊泡的遗传稳定性,这表明通过反向遗传操作技术表达外源蛋白的策略是可行性。在上述载体的基础上,我们进一步构建了表达鼠源IL-7的重组狂犬病病毒样囊泡,并通过IFA鉴定了该重组病毒样囊泡已成功拯救,命名为rVLVs-mIL7-OptiG。同时,利用ELISA测得IL-7在rVLVs-mIL7-OptiG感染的BHK-21细胞中可以被成功表达并呈现剂量依赖性。细胞活性试验结果表明IL-7的表达不影响感染细胞的活性;生长曲线的测定结果表明,IL-7基因的插入不影响病毒样囊泡的体外增殖,且rVLVs-mIL7-OptiG经过10次连续传代后可以检测到IL-7基因以及IL-7的表达,表明该病毒样囊泡具有稳定遗传的特性。我们进一步对rVLVs-mIL7-OptiG的致病性和免疫原性进行了研究。我们将rVLVsmIL7-OptiG和rVLVs-e GFP-OptiG分别采用脑内注射途径感染成年小鼠和乳鼠,通过监测感染小鼠的生存情况、体重变化以及脑内的病毒载量,发现rVLVs-mIL7-OptiG感染后限制了病毒在脑内的增殖,从而提高重组狂犬病病毒样囊泡的安全性。在免疫原性研究中,我们发现rVLVs-mIL7-OptiG免疫小鼠后诱导的中和抗体水平与rVLVs-eGFPOptiG相当。综上所述,本研究成功构建并拯救了表达鼠源IL-7的重组狂犬病病毒样囊泡rVLVsmIL7-OptiG,其在小鼠模型中诱导的抗体水平与rVLVs-e GFP-OptiG所诱导的相当,且具有更高的安全性,为安全、高效的狂犬病新型疫苗的研究提供新的思路。