“通利大肠”调节COPD模型大鼠肺组织神经肽SP、VIP的实验观察

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“肺合大肠”理论源于《黄帝内经》,是传统医学脏腑相关理论的组成部分。从古至今广泛应用在中医临床中,不断得到临床的验证,同时通过临床疗效的验证,也使该理论得到更好的丰富和完善。慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是以气流不完全受限为特征的肺部疾病。COPD发生的主要原因可能是长期反复的感染、空气中或工作生活环境中刺激性的有害物质吸入过多、患者抗病力及其体质下降等。COPD在全球范围内都是较为严重的疾病,在全球导致死亡的疾病中排名第四位。本课题在文献研究及理论研究的基础上,基于传统医学中的“肺合大肠”理论,通过复制大鼠COPD模型,从神经肽的角度,观察宣白承气汤及其拆方对COPD大鼠肺组织神经肽P物质(Substance P, SP)、血管活性肠肽(Vasoactine Intrestinal Peptide, VIP)的影响,探讨通利大肠疗法对COPD的效应机制。本论文总共分为三个部分:第一部分文献综述本部分主要系统的阐述了神经肽SP、VIP在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展,以及中医学对慢性阻塞性肺疾病的研究近况。现代研究发现,神经肽SP、VIP在呼吸系统疾病如COPD病理变化中发挥着重要作用,不仅在呼吸机能的调节上起到一定作用,而且在神经源性气道炎症上也起着一定的作用。中医学从整体观出发,通过辨证论治和多途径、多角度的治疗方法,在COPD的现代临床研究中取得较大的进展。第二部分理论探讨通过梳理《伤寒论》中与“肺合大肠”理论有关的病机及其辨证施治的方法,深入了解仲景对“肺合大肠”理论的认识,同时结合“肺合大肠”理论的现代研究,共同探讨通利大肠的疗法对COPD的防治效用。在此基础上,通过对继承和发扬《伤寒论》“肺病治肠”思想的宣白承气汤进行探讨,来初步阐述具有“通腑泄下”作用的宣白承气汤在COPD治疗中的应用及作用机理。第三部分实验研究目的:为探讨“通利大肠”对COPD的疗效机制,建立COPD大鼠模型,选用宣白承气汤及其拆方,观察正常组、模型组、治肠组、治肺组及肺肠同治组的变化。通过动物行为学、病理形态学等方法观察实验大鼠的行为及其肺组织病理上的改变,观察宣白承气汤及其拆方对COPD大鼠的防治作用。通过运用免疫组化法和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)来观测各组大鼠肺组织中神经肽SP、VIP的含量变化,并进一步分析宣白承气汤及其拆方对COPD模型大鼠的调节作用,及其这种调节作用与神经肽SP、VIP含量变化的关系,旨在从神经肽角度揭示“从肠论治”对COPD的疗效机制。方法:采用气管内注射脂多糖(LPS, Lipopolysaccharide)加熏香烟方法复制COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肠组、治肺组及肺肠同治组。采用宣白承气汤及其拆方干预,正常组、模型组灌胃蒸馏水,各给药组灌胃相应中药,连续7d。熏烟期间观察各组动物的一般情况;采用苏木素-伊红染色(hematoxylin and eosin,HE)染色在光镜下观察大鼠肺部的形态学改变;免疫组化法观察宣白承气汤及其拆方对COPD模型大鼠肺组织SP、VIP含量和分布特征的影响;酶联免疫法(ELISA)测定肺组织匀浆中SP和VIP含量。结果:动物行为学:与正常组相比其余各组大鼠在整个造模过程中,动物表现为由开始的烦躁不安转为精神萎靡不振。随着造模过程的推进,动物身体毛发逐渐枯槁、发黄、无光泽。呼吸急促、喘息、腹式呼吸加重,鼻头日渐发红。饮水增加,活动减少,喜拱背蜷缩,喜扎堆聚集。大便偏干。与正常组大鼠相比,其余各组大鼠明显消瘦。病理形态学观察:光镜下观察显示,正常组大鼠肺结构无异常;与正常组比较,模型组大鼠支气管管壁有少量炎性细胞浸润。肺泡结构紊乱,肺泡血管内充血严重。与模型组相比:治肠组大鼠的肺组织病理状况有所减轻。与治肺组相比:肺肠同治组大鼠肺组织病理状况缓解较为明显。免疫组化法观察:神经肽SP在正常大鼠肺支气管上皮、肺间质中可见表达,模型组较正常组表达增强,与模型组相比,治肠组、肺肠同治组SP表达减弱。神经肽VIP在正常大鼠支气管上皮表达较强,模型组表达明显减弱,各治疗组VIP表达明显增强。酶联免疫吸附法检测:与正常组相比,模型组肺中SP含量明显升高,模型组肺VIP含量明显降低(P<0.01)。与模型组相比,治肠组、治肺组、肺肠同治组肺组织SP含量均明显降低(P<0.01),VIP含量均明显升高(P<0.01或P<0.05)。与治肺组相比,肺肠同治组肺组织SP含量明显降低(P<0.05)结论:本课题应用宣白承气汤及其拆方,采用“通利大肠”或在治肺的基础上增加“通利大肠”的方法对COPD大鼠肺组织的病理状况有改善作用。同时对COPD模型大鼠肺组织神经肽SP、VIP含量也有一定的调节作用。这些作用可能与应用“通利大肠”疗法调节了肺组织中神经肽SP、VIP的含量有关,这可能是COPD从肠论治的效应机制之一。
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