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目的:研究外周血中γ-干扰素(IFN-γ)、γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及其对活动性结核病的诊断价值。方法:受试者共292例,包括40例健康对照者、95例非结核呼吸疾病患者(肺癌患者17例、肺炎44例、COPD25例、其它9例)和157例活动性结核病患者(肺结核患者108例、结核性脑膜炎患者5例、结核性胸膜炎26例、结核性腹膜炎3例、结核性多浆膜炎5例、淋巴结核4例、附睾结核1例、骨结核4例、左肾结核1例)。通过化学发光免疫分析法检测外周血经植物血凝素(PHA)和结核特异性CFP-10/ESAT-6抗原刺激后IFN-γ、IP-10及MCP-1的表达水平。比较不同抗原浓度和培养上清稀释度对细胞因子表达水平检测的影响,最终确定了实验方法。 PHA和CFP-10/ESAT-6融合蛋白刺激浓度均为20μg/mL,原倍培养上清检测IFN-γ的含量,10倍稀释培养上清检测IP-10及MCP-1的含量。绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristiccurve,ROC曲线),分别确定IFN-γ、IP-10及MCP-1诊断活动性结核病的临界值,并评价各自的诊断效能。结果:1.未刺激外周血培养上清液(阴性对照孔)中,IFN-γ和IP-10的含量三组间无明显差别;MCP-1的含量活动性结核病组高于非结核呼吸疾病组,非结核呼吸疾病组高于健康对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。2. PHA刺激后,活动性结核病组与非结核呼吸疾病组外周血培养上清液中IFN-γ、IP-10和MCP-1的含量均明显低于健康对照组(P<0.05),而活动性结核病组与非结核呼吸疾病组差异无统计学意义(P>0.05)。3.经结核分枝杆菌CFP-10/ESAT-6融合抗原刺激后,活动性结核病组外周血培养上清液中IFN-γ、IP-10和MCP-1的含量均明显高于非结核呼吸疾病组和健康对照组(P<0.01),而非结核呼吸疾病组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。4.观察影响因素显示:(1)经CFP-10/ESAT-6融合抗原刺激后活动性结核病患者培养上清中IFN-γ、IP-10和MCP-1的含量在淋巴细胞计数<1.0×109组中显著低于淋巴细胞计数≥1.0×109组(P<0.05)。(2)经CFP-10/ESAT-6融合抗原刺激后活动性结核病患者培养上清中IFN-γ、IP-10和MCP-1的含量在不同年龄组、抗酸杆菌涂片阳性和阴性组间、肺结核与肺外结核组间,均无显著性差异(P>0.05)。(3)经CFP-10/ESAT-6融合抗原刺激后结核病患者PPD皮试阳性组培养上清中结核特异的IFN-γ显著高于PPD皮试阴性组(P<0.05),IP-10和MCP-1的含量两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。5.本研究以活动性结核病组为阳性组,健康对照组和非结核呼吸疾病组为阴性组,应用SPSS17.0绘制ROC曲线,得到CFP-10/ESAT-6融合抗原刺激全血后培养上清结核特异的IFN-γ、IP-10和MCP-1的含量分别>256pg/ml、>190pg/ml和>389pg/ml作为活动性结核病的辅助诊断标准。IFN-γ、IP-10和MCP-1的敏感性分别为57.3%、68.2%和92.8%;特异性分别为80%、80%和80.7%;阳性预测值分别为76.9%、78.7%和84.9%;阴性预测值分别为61.7%、67.9%和78.7%;准确率分别为76.9%、78.7%和84.9%。IFN-γ、IP-10和MCP-1三种细胞因子中IFN-γ的敏感性最低,IP-10次之,MCP-1最高;三者特异性相接近;阳性预测值与阴性预测值MCP-1最高,IP-10较IFN-γ略高。结论:通过化学发光酶免疫分析方法检测经CFP-10/ESAT-6融合蛋白刺激后全血培养上清中IFN-γ、IP-10和MCP-1三种细胞因子的表达水平,可辅助活动性结核病的诊断及鉴别诊断。IP-10和MCP-1诊断的灵敏度和准确率高于IFN-γ,可在临床推广,作为活动性结核病的辅助诊断方法。