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背景:宫腔粘连（Intrauterine adhesion,IUA）是子宫内膜严重损伤,功能性修复障碍,代之以纤维结缔组织,使子宫内壁间粘连,造成宫腔部分或全部闭塞的一种疾病。患者主要表现为月经量减少甚至闭经、痛经、不孕或反复流产,以及严重的胎盘并发症,是育龄期妇女子宫性不孕常见而难治的原因。宫腔镜下粘连松解术是目前唯一证明对损伤相对轻者有效的方法,但是对重度IUA患者,术后粘连复发率高,妊娠率、活产率低下。IUA特征性病理变化是子宫内膜纤维化,但其形成机制尚不清楚。本课题组前期研究发现,在IUA患者内膜组织中,正常内膜不表达的ΔNp63α异源性高表达,它促进子宫内膜上皮细胞（Endometrial epithelium cells,EECs）间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）。而mi RNAs是EMT和纤维化的重要调节因子。但迄今,调节人子宫内膜纤维化的mi RNAs相关研究,尚未见报道。作为mi RNAs重要的调节者,circ RNAs被证实参与多种生理和病理过程,但在IUA及内膜纤维化中的调节作用,至今也未见报道。因此,本研究通过高通量测序筛选出IUA中重要的分子,mi R-21-5p和circ PTPN12,并提出假说:circ PTPN12/mi R-21-5p/ΔNp63α轴调控异常促进IUA的发病。目的:确定IUA患者子宫内膜中存在circ PTPN12/mi R-21-5p/ΔNp63α调节轴,阐明该轴调控异常在IUA发病机制中的作用,为IUA治疗提供有效的靶点。方法:1.应用高通量测序筛选IUA患者子宫内膜组织中差异表达的mi RNAs,通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）、RNAscope技术验证mi R-21-5p的表达量,通过micro RNA数据库预测、荧光素酶报告基因实验和Western blotting检测验证mi R-21-5p与ΔNp63α之间的靶向关系,并分析mi R-21-5p及ΔNp63α在子宫内膜上皮细胞（Endometrial epithelium cells,EECs）中高、低表达后EMT和纤维化指标的变化。2.应用mi Randa数据库预测和高通量测序筛选IUA患者子宫内膜组织中与mi R-21-5p存在结合位点的circ RNAs的表达特征,通过q RT-PCR验证circ PTPN12的表达量,通过荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验、荧光原位杂交和RNA免疫共沉淀实验验证circ PTPN12与mi R-21-5p之间的结合关系,并且验证circ PTPN12、mi R-21-5p和ΔNp63α在EECs中表达变化引起的EMT和纤维化指标的变化。3.体内实验进一步探究circ PTPN12、mi R-21-5p在机械损伤小鼠的内膜组织中表达变化引起的EMT和纤维化指标的变化。结果:1.正常子宫内膜组织中表达丰度最高的mi R-21-5p在重度IUA患者子宫内膜组织中显著下降,而且RNAscope显示mi R-21-5p主要表达于上皮细胞中。mi R-21-5p表达降低使其对ΔNp63α的靶向负性调控被抑制,ΔNp63α高表达,促进内膜上皮间质转化。2.高通量测序及q RT-PCR分析发现,circ PTPN12表达量在重度IUA患者子宫内膜组织中较对照组增高64倍。circ PTPN12来源于PTPN12基因的5～8外显子,与mi R-21-5p共定位于上皮细胞胞浆中。circ PTPN12与mi R-21-5p有3个互补结合位点,本研究通过逐一突变单个位点分析,证明仅有1个位点具有功能活性。circ PTPN12吸附mi R-21-5p,降低mi R-21-5p功能活性及表达量,并促进mi R-21-5p的靶基因ΔNp63α的表达,促进EEC-EMT。3.宫腔注射AAV-circ PTPN12明显抑制了机械损伤小鼠子宫内膜组织中mi R-21-5p的表达,促进ΔNp63α的表达,使机械损伤小鼠子宫内膜EEC-EMT和纤维化水平变得明显,而高表达mi R-21-5p后,组织切片的免疫组化分析,显示其可以逆转AAV-circ PTPN12宫腔注射引起的EEC-EMT和内膜纤维化。结论:重度IUA患者子宫内膜组织中高表达的circ PTPN12,通过吸附mi R-21-5p,增加mi R-21-5p靶基因ΔNp63α的表达,促进EEC-EMT内膜纤维化,最终导致IUA的发病。本研究揭示的IUA内膜中circ PTPN12/mi R-21-5p/ΔNp63α轴调控机制为治疗IUA提供了新的干预靶点。