背景:细胞骨架是一种聚合物结构,是最复杂、功能最广泛的结构之一,参与细胞吞噬、细胞分裂、细胞内运输、运动、力传递、对外力的反应、粘附和保存、细胞形状适应等过程。线皮素-1(ladinin-1,LAD1)就是这样一个细胞骨架相关蛋白,是一种基底膜的胶原锚定纤维蛋白,负责维持真皮-表皮连接处的凝聚力。据目前报道,LAD1在多个上皮器官中表达,如肾脏和肺且与乳腺癌的迁移,侵袭有关,但目前没有与非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer,NSCLC)的相关报道。据此猜测LAD1在肿瘤发生发展中发挥其负面作用,本实验探究LAD1在NSCLC的发生发展中的生物学功能,为NSCLC的临床治疗寻找新的治疗靶点,提供相应的实验依据。方法1.在基因芯片层面上以及通过GEPIA数据库和TCGA数据库分析LAD1在NSCLC中的表达。通过Kaplan Meier plot(KM)以及TCGA数据库分析LAD1的表达与NSCLC不良预后的相关性。统计学分析LAD1与NSCLC患者的临床病理相关性。2.采集NSCLC细胞系以及临床样本,提取总RNA。用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测LAD1 mRNA表达水平,(Western blotting,WB)检测蛋白表达水平。siRNA敲低LAD1,RT-PCR检测敲低LAD1后mRNA表达水平,采用WB检测敲低LAD1后蛋白表达水平。3.敲低LAD1后检测siLAD1在NSCLC中的生物学功能,CCK-8法检测细胞存活率,克隆形成法和实时细胞分析仪(Real Time CellAnalyzer,RTCA)siLAD1对癌细胞集落形成的影响,细胞迁移、侵袭能力通过RTCA和Transwell小室进行检测,细胞周期分布以及细胞凋亡情况通过流式细胞术分析,WB检测相关蛋白表达水平。结果1.LAD1组织芯片中是高表达的,TCGA,GEPIA数据库显示LAD1在NSCLC中高表达,KM以及TCGA数据库显示LAD1的高表达与NSCLC的不良预后相关。统计学发现LAD1的高表达与肿瘤分期相关。2.实时定量PCR方法检测50例NSCLC组织对照样本中有46例样本显示癌组织的LAD1 mRNA表达高于癌旁组织。NSCLC细胞系中GLC和NCI-H292LAD1mRNA显著高表达。siLAD1干扰NSCLC细胞系后,NSCLC细胞系中GLC和NCI-H292 LAD1 mRNA的表达量显著降低。蛋白印迹显示50例癌症组织中有30例的蛋白表达量低于正常组织。3.敲低LAD1基因后GLC和NCI-H292细胞增殖、侵袭及迁移能力显著下降,N-cadherin和Vimentin蛋白表达量降低。对细胞周期有阻滞作用,在NCI-H292,GLC细胞系中,阻碍了细胞G1期向S期的转变,CyclinD1表达量降低。在NCI-H292,GLC细胞系中均表现为促进细胞凋亡的功能,相关蛋白P-ERK,P-AKT,Bcl2表达量降低,Active Caspase3和其剪切体Cleaved PAPR1表达量上升。结论:LAD1可能作为NSCLC发生的促癌基因,参与了NSCLC的发生及发展过程。LAD1有望成为NSCLC治疗的潜在靶点。