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光是植物生长发育的基本环境因素,植物通过光受体介导的光信号转导途径来调控自身的生长发育。蓝光受体隐花色素(cryptochromes)参与下胚轴抑制,光周期控制的开花,气孔和叶绿体发育,生物钟调控,向性生长等生理过程。H2S信号分子调节植物生长发育并参与生物、非生物胁迫的响应,其作用机理是对蛋白质的翻译后修饰(S-sulfhydrylation),作用位点是半胱氨酸残基。本论文以拟南芥野生型Col,蓝光受体突变体cry1、cry2和cry1/2为实验材料,分别在蓝光处理5、10、15 min取样,检测H2S含量、产生速率和主要内源H2S产生酶编码基因转录变化;比较黑暗和蓝光处理H2S对种子萌发、胚轴伸长的影响;并对生物素开关法检测蛋白质巯基化修饰的实验方法进行改进。实验结果如下:(1)生物素开关法:改进后的方法比Mustafa的方法减少了丙酮沉淀、HEN缓冲液重悬的操作;减少蛋白质样品的损失,节省实验时间。该方法适用于从植物总蛋白或来自大肠杆菌的纯化重组蛋白。(2)蓝光对拟南芥H2S含量的影响:野生型Col和突变体cry1的H2S含量在蓝光照射5 min时就显著增加;cry1比Col增加更快,在5-10 min趋于稳定,Col在5-15 min持续上升;突变体cry2的H2S含量在5-15 min有升高的趋势,但升高程度和升高速度低于Col和cry1;在双突变体cry1/2中,H2S含量从黑暗到蓝光照射15 min变化不明显。(3)蓝光对拟南芥H2S产率的影响:蓝光照射的前5 min时间段,野生型Col中H2S产率升高,之后下降到与黑暗条件下相近,并趋于稳定;突变体cry1的H2S产率在蓝光照射的前10 min内无明显变化,在10-15 min时间段迅速升高;突变体cry2和cry1/2的H2S产率在蓝光处理的15 min时间段,无明显变化。(4)At-LCD磷酸化:蓝光处理拟南芥后的总蛋白与原核纯化的At-LCD蛋白反应40 min、60 min有微弱磷酸化条带。(5)蓝光对拟南芥内源H2S产生酶编码基因转录的影响:在蓝光处理后,Col、cry1、cry2中At-LCD、At-DES1基因表达量上升,cry1/2的At-LCD、At-DES1表达量无明显变化。(6)蓝光下外源H2S对拟南芥萌发的影响:黑暗条件下10μmol/L H2S抑制萌发,蓝光条件下10μmol/L H2S没有明显作用。(7)蓝光下外源H2S对拟南芥胚轴伸长的影响:相同H2S处理浓度下,各植物材料的胚轴长度无明显差异;黑暗条件下,40、60μmol/L H2S明显抑制拟南芥下胚轴伸长;蓝光条件下,H2S处理浓度越高胚轴长度越短;与黑暗条件下的结果比,蓝光照射后H2S抑制胚轴生长的作用更加明显。