PAd-RFP/BMP2-Mbs复合体转染BMSCs并促其向心肌细胞分化的体外实验

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lady408
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨携生物素化的骨形态发生蛋白2并标记红色荧光的重组腺病毒-微泡复合体(PAd-RFP/BMP2-Mbs)利用超声靶向爆破微泡定位释放技术(UTMD)体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过BMP2过表达促进BMSCs向心肌细胞定向分化的可行性。方法:提取、分离、纯化大鼠BMSCs,取P3代BMSCs随机分为 5 组:Ⅰ组:单纯 BMSCs 组(对照组);Ⅱ组:超声+微泡+BMSCs 组(BMSCs+UTMD);Ⅲ组:超声+BMSCs组(BMSCs+U);Ⅳ组:微泡+BMSCs组(BMSCs+M) ; Ⅴ 组 : 超 声 + 微 泡 +BMSCs+ PAd-RFP/BMP2 组(BMSCs+UTMD+BMP2);超声辐照体外转染并培养诱导BMSCs向心肌细胞分化,于转染后24h、48h、72h观察BMP2表达情况,转染72h后检测 PAd-RFP/BMP2在BMSCs中的转染率,CCK8法检测BMSCs的活性,转染后72h通过RT-PCR及Western blot检测PAd-RFP/BMP2的mRNA含量及蛋白在BMSCs中的表达,转染后第14天通过Western blot检测心肌特异性蛋白cTnT、Cx43、α-MHC,α-actin的表达,同时以RT-PCR技术检测心脏特异同源转录因子(Nkx2.5)和锌指结构转录因子(GATA-4)的mRNA表达量。结果:观察转染后24h、48h、72h第Ⅴ组的BMSCs,红色荧光细胞数逐渐增多,检测第Ⅴ组红色荧光细胞的数量为80%,第Ⅴ组转染率为85.1%,CCK8值比较:转染组与未转染组吸光度(A)比较无统计学差异(P>0.05), RT-PCR及Western blot检测结果显示,BMP2mRNA及蛋白含量仅在第Ⅴ组中存在高表达,与未转染组比较(P<0.05);转染后第14天Western blotting检测结果:cTnT、Cx43、α-MHC,α-actin含量在第Ⅴ组中表达量高,转染组与未转染组比较具有统计学差异(P<0.05);RT-PCR检测结果:Nkx2.5和GATA-4mRNA含量在第Ⅴ组中表达量高,与未转染组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:携PAd-RFP/BMP2-Mbs腺病毒-微泡复合物联合UTMD技术可成功转染BMSCs,转染后通过BMP2过表达,可成功诱导BMSCs向心肌细胞定向分化。
其他文献
“咬笔头,皱眉头,苦思冥想难想一句话。”这是作文课上常见的一幕!小学生由于知识结构还不完善,知识层次不够丰富,习作时往往文思呆滞、语言枯燥、内容单调,味同嚼蜡。久而久之,学生对作文失去兴趣,甚至“谈作色变”。这种现状,值得深思。其实,“学生对所写材料的兴趣,是直接推动学生主动学习的心理动机”。生活中有许多美好的事物、情境、人物和心灵,它们会自然而然地唤起学生对美的期待和向往。因此激发学生的习作兴趣
各种版本的小语教材都选编了一些有关风土人情、天文地理、生物生态的常识性课文。这类文章能帮助学生扩大知识面,激发学生热爱科学的兴趣。教师应该运用“情境法”教学这类常识性课文,让学生在情境中教、学、练,扎扎实实地抓好语言训练,老老实实地培养学生的听说读写能力。  一、创设情境激趣  著名心理学家皮亚杰说过:“所有智力方面的工作都依赖于兴趣。”兴趣是学生学习的最好老师。在常识性课文教学中,教师须努力创设
语文教学离不开生活,生活中处处都有语文的气息。在语文教学中,要关注学生生活,让学生感受生活、参与生活、再现生活实际。因为在生活情境中理解语文、运用语文,把生活经验理论化,把语文知识生活化,是提高学生语文素养的有效途径之一。  一、利用生活化的手段,创设语文教学情境  良好的学习环境、宽松的人际环境对学生良好心理品质、认知等方面的培养有着不可估量的作用。教师善于模拟生活化的课堂环境,使学生在无拘无束
近日,听了一节《背影》的课堂教学,有所思。首先,教者投影资料导入:“‘五四’是个反传统的年代,是个‘打死父亲’的年代,‘五四’文学的父亲形象都是负面的;而《背影》不同,在中国现代文学作品里,它第一次重点刻画了一位正面的父亲形象。在‘满街走着坏爸爸’的情况下,这一个‘好爸爸’一下子激起了无数读者的共鸣。”(倪文尖《 何以成为经典?》。语出教参,原载《语文学习》2002年第2期)然后,以“‘父亲’有哪
育秧产业化是近几年兴起的农业产业化形式之一,从育秧方式可分为旱育秧商品秧、抛秧商品秧、工厂化育秧商品秧三种类型。但就其商品化程度来划分有商品化供秧、半商品化供秧
2012年9月13日下午,广州市越秀区区长王焕清(右--)在区教育局陈军局长、蔡定基书记等领导的陪同下,到培正中学慰问教师并了解学校发展情况。
本文通过对荣华二采区10
期刊
“类比推理”与“归纳推理”作为“合情推理”的两翼,对培养学生的创新意识具有重要意义.笔者对“归纳推理”的教学做了一些探索,通过教学案例分析,并结合有关教育理论构建“归纳推理”的教学模式.  1. 在新授课教学中的运用  注重知识的形成过程,暴露思维过程是数学教学的基本原则,不少数学结论是用归纳方法得出的,教师要创设情景,正确引导,让学生体验发现的快乐.  例1:探索集合子集的个数.  高一数学,讲
一、课本剧表演  创设真实的语言环境有利于学生表达自己的观点,交流情感,但并不是所有的课文都能创设情景,尤其是一些抽象的内容,难以理解,进行口语交际有一定难度。如果我们借助身体语言诠释基本知识,比呈现情景更容易被学生所接受,有助于消除交流的障碍。  PEP三年级下册Unit 6 “At The Zoo”,学习高、矮、大、小等形容词,并用于描述人物或事物,当中涉及的句型较为复杂,描述人物和事物的句子
冬小麦全生育期地膜覆盖穴播技术经1994~1995年在我县的多点示范及1996年的大面积示范推广,证明其具有显著的增温、保墒、增产、增收效果,并在栽培技术方面取得了很大进展,但在有些关键技术环