斑马鱼性腺发育相关基因的表达与分析

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RNA干扰(RNAi)能高效特异地阻断体内基因的表达,是一种有效的基因功能分析方法。基因芯片具有多样品并行处理能力、分析速度快、所需样品量少等优点。目前此两种方法均已成功地从不同角度运用于多种鱼类基因的功能分析。本研究选择一些已报道的性腺发育相关基因(cyp19a、cyp19b、cyp11a1、gata4、dmrt1和wt1)通过RT-PCR和荧光定量PCR方法分析各个基因在斑马鱼发育不同阶段(64细胞期(2h)、256-512细胞期(2.5h)、囊胚球体期(4h)、30%外包(4.6h)、50%外包(5.2h)、75%外包(8h)、原肠封口期(10h)、10-15体节期(15h)、成型期10-20(32h)、孵化期(60h)、幼苗期(120h)、7d、10d、12d、14d、16d、18d、20d、22d、24d、26d、28d和30d)的表达情况。结果显示cyp19a与cyp19b基因随着胚胎的发育表达量逐渐增加在28d-30d达到最高;gata4基因在胚胎封口期表达量最高随后降低;dmrt1基因在30%外包表达量最高随后逐渐递减;wt1基因在10-15体节期表达量最高随后逐渐递减并保持稳定的表达。在此基础上,根据cyp19b和cyp11a1设计siRNA载体,注射到斑马鱼早期胚胎内,筛选出靶基因表达被高效特异抑制的个体。利用基因芯片技术在斑马鱼基因组水平查找与该基因相关联的其他基因。干扰cyp19b基因的结果:差异表达基因总数43个,上调基因39个,下调基因4个。干扰cyp11a1基因的结果:差异表达基因总数54个,上调基因33个,下调基因21个。本研究为深入了解特定基因在生殖腺发育的分子调控网络及机理提供了一些有价值的基础资料。
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