枯草芽孢杆菌SL-44对辣椒防病促生性能及作用机制研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:lt96047
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针对新疆地区立枯丝核菌引起的红辣椒苗期立枯病的严重问题,本文采取生物防治法抑制立枯丝核菌的生长,测试枯草芽孢杆菌SL-44对辣椒的促生性能和防病效果,以应对立枯丝核病产生的危害并促进辣椒植物的生长;考察SL-44诱导植物系统抗性的类型,解析SL-44激活植物抗性的信号通路和分子机制;对SL-44发酵液进行抗菌化合物的提取与鉴定,明确抗菌脂肽的种类。现将主要研究结果总结如下:1、菌株SL-44是从植物根部土壤的微生物群落中分离的、具有生物防治及植物促生作用的枯草芽孢杆菌。对菌株SL-44在控制辣椒立枯丝核病菌Rhazoctonia.solani及促进辣椒苗期生长方面的能力进行评价。盆栽试验结果表明,同时接种SL-44和病原真菌R.solani(S-R)的辣椒苗,与仅接种R.solani(R)的辣椒苗相比,干重和鲜重分别增长45.5%和54.2%,株高增长14.2%;与对照(CK)辣椒苗相比,干重和鲜重分别增长18.2%和31.8%,株高增长9%。体外抗菌活性测试发现SL-44对R.solani具有较强的抑菌活性,抑菌率达到42.3%。通过溶磷性能测试发现SL-44具有较强溶磷性能,对无机磷的溶解量为60.58 mg/L。此外,SL-44具有产嗜铁素、固氮和分泌IAA的能力,IAA产量最高达到7.5μg/mL。SL-44具有根部定殖能力,并能够与植物发生互作。2、考察生防枯草芽孢杆菌SL-44对辣椒植物防御反应产生的影响,分析生防菌激活的辣椒植物防御反应的信号通路。经12 h的混合反应后,显微镜观察SL-44滤液可引起立枯丝核菌菌丝的破坏和断裂;菌株SL-44接种的辣椒叶片,其抗性相关酶SOD、POD、CAT、PPO、PAL活性与对照相比明显升高;植物组织化学与荧光学染色试验表明,SL-44处理后的辣椒叶片中活性氧(ROS)和胼胝质大量累积;但并未提高植物叶片中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性;RT-PCR试验表明,SL-44处理的辣椒抗性相关防御基因CaPINⅡ(与茉莉酸依赖的信号通路相关)的表达量较对照明显增加。因此,枯草芽孢杆菌SL-44主要激活辣椒植物中JA介导的信号通路,诱导辣椒植物的系统抗性(ISR)。3、通过对枯草芽孢杆菌SL-44的发酵培养液进行分离、过滤和浓缩,得到抗菌粗提物。检测粗提物对温度、酸碱和有机溶剂的稳定性。通过考察粗提物的抑菌效果可知,当温度为30°C,pH为5.0时抑菌效果最佳,抗菌粗提物同时可耐受氯仿、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚等有机溶剂。通过对SL-44抗菌粗提物进行鉴定,发现粗提物中含有surfactin、iturin和fengycin类抗菌多肽物质。对SL-44菌株发酵培养基进行优化发现LB培养基发酵的菌株OD600值最大为13.6,更适合菌株SL-44的生长,发酵后菌液的pH也在合理范围内。而TY培养基则更适合SL-44大量产生芽孢,适合菌株在农业生防作用上的大规模应用。综合以上分析,枯草芽孢杆菌SL-44对立枯丝核菌具有良好的防治效果并能够促进辣椒的生长,同时可诱导辣椒产生系统抗性,SL-44发挥抑制立枯丝核菌的防病作用关键在于产生了iturin和fengycin类的抗真菌多肽物质。因此,SL-44具有潜在的应用价值,有望作为生防制剂广泛地应用于现代农业中。
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