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目的：
1.对葛根芩连汤进行HPLC指纹图谱研究,为控制葛根芩连汤类中成药制剂质量奠定基础。
2.UPLC-MS法同时测定葛根芩连汤中八个组分含量,监测各组分的在配伍中的变化情况。
3.分析各配伍组合化学组分群在体内血药浓度变化,研究葛根芩连汤各配伍的药代动力学规律。
方法：
1.葛根芩连汤的HPLC指纹谱分析。样品经过甲醇超声提取后,采用HPLC法,通过对流动相组成、梯度、波长条件优化,确定以甲醇：0.5％甲酸和0.5％三乙胺水溶液为流动相,线性梯度为在0～90min内甲醇比例为26％～70％时,建立270nm波长下的指纹图谱。
2.葛根芩连汤的UPLC-MS分析。本实验对UPLC液相方法中流动相梯度、添加物、流速、柱温以及质谱条件中各化合物裂解电压进行优化,确定以甲醇：0.1％甲酸和5mmol/L乙酸铵水溶液为流动相,在0～1min内甲醇比例从35％线性升至45％,1～6min内从45％线性升至55％,柱温30℃,质谱采用正离子模式,离子采集方式采用选择离子反应监测模式(SIR)对葛根芩连汤中8个有效组分进行含量测定。
3.葛根芩连汤多组分药代动力学研究。大鼠灌胃给予葛根芩连汤20g/kg,给药前及给药后不同时间点采集血样200μL,以5％甲酸甲醇200μL沉淀蛋白再加13mL乙酸乙酯提取血浆中代测组分,在体外多组分UPLC-MS分析的基础上,内标法研究各配伍中各化学组分在大鼠体内血药浓度变化。
结果：
1.建立了葛根芩连汤的HPLC指纹谱检测方法,四种药材葛根、黄芩、黄连和炙甘草的组分鄙得到很好的分离,葛根素,大豆苷元等11个对照品均能检出。
2.UPLC-MS液质联用方法可以在6min内同时对葛根芩连汤中8个有效组分(葛根素、大豆苷元、黄芩苷、汉黄芩苷、甘草苷、小檗碱、药根碱、巴马汀)进行含量测定,方法特异性强、快速、线性范围广,符合方法学考察的要求。
3.建立了葛根芩连汤中八种有效成分的药时曲线,各组分约动学参数经DAS2.0软件拟合,葛根素和大豆苷元的药时曲线符合二房室药动学模型,小檗碱、药根碱和巴马汀药时曲线呈一房室动力学模型,黄芩苷和汉黄芩苷药时曲线出现双峰现象,可利用统计矩估算其药动学参数,甘草苷含量较低,进入大鼠体内后仅在达峰时间前后测到其血药浓度值。比较不同配伍的药动学参数,提示配伍对复方中含量较高的物质葛根素、大豆苷元、小檗碱、黄芩苷、甘草苷显著性有影响(P<0.05),而至于复方中含量较低的药根碱、巴马汀在各配伍间没有显著性差异。
结论：本课题通过对葛根芩连汤HPLC指纹谱的分析,UPLC-MS多组分含量测定及体内8个有效成分的药代动力学研究,为建立以现代中医理论为指导、中药指纹图谱和多指标成分定量分析为手段的中药的复方质量控制模式与评价方法奠定基础。