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芸薹属具有一个由多基因控制的典型的孢子体自交不亲和系统,在单倍体中是单一的S位点控制的自交不亲和系统。几个S基因和S相关基因已经得到分离和遗传及生化鉴定。SLG和SRK基因与S位点紧密连锁,并直接参与自交不亲和反应。自交不亲和反应从花粉携带的配体S位点蛋白11(即SP11/SCR)和对应的柱头S受体激酶SRK之间发生特异性的相互作用开始的。SRK与SP11特异性的结合引起SRK基因的自动磷酸化,然后引发一系列导致自花花粉受到排斥的信号反应。修饰基因的隐性突变可以消除柱头中的SI反应。M位点的克隆表明它编码一个跨膜的细胞质丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,称之为M位点蛋白激酶(MLPK)。MLPK的瞬间表达可以使乳突细胞具有拒绝自花花粉的能力。这表明MLPK是芸薹属自交不亲和信号传导反应中的一个积极调节者。但是对甘蓝这一作物而言我们到目前仍然不知道控制自交不亲和反应的S位点基因位于哪些染色体上,或位于哪些染色体的什么位置上。 芸薹属是世界范围内具有重要地位而得到广泛种植的作物品种,它含有三个基本的染色体组(分别是A,B和C;n=10,8和9)以及分别含有这三个基本染色体组的纯合二倍体和含有以上双二倍体的异源四倍体种。甘蓝(CC,2n=18)包括花椰菜,卷心菜,花茎甘蓝和布鲁塞尔苗四大类。S位点基因在甘蓝染色体上的定位能提供与当前已经得到研究的分子标记图谱相互补的信息,以及基因在染色体上定位及相关的染色体结构特征,对今后开展更大范围的研究具有重要意义, 在本论文中,我们采用荧光原位杂交技术结合图象处理方法,对甘蓝种B.oleracea.var.capitata.中的SRK单拷贝基因进行染色体定位研究,同时对该典型自交不亲和结球甘蓝花粉母细胞减数分裂染色体行为进行观察,讨论了部分染色体异常行为出现的可能原因及对甘蓝结实率的影响。 1.对500个以上典型自交不亲和性结球甘蓝(Brassica.oleracea var.capitata)纯合二倍体花粉母细胞减数分裂各时期染色体行为观察表明:纯合二倍体甘蓝花粉母细胞在自然条件下减数分裂的双线期,终变期,中期Ⅰ有高频率的1~3个四价体和高频率的1~3对同源染色体提早分离和滞后分离两种异常情况:这些异常现象表明甘蓝染色体组内存在着部分同源现象的同时也存在着部分异源现象。这证实了该甘蓝品种确实是由一染色体数为6的基本种通过染色体加倍进化而来的,并可能在进化过程中掺入了外源染色体,同时讨论了甘蓝结实率不高与这些染色体异常行为之间的关系。 2.用PCR扩增得到的甘蓝S-受体激酶(S-receptor kinase,SRK)基因作为探针,与中期和后期细胞染色体进行荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridation,FISH),确定了该基因在染色体上的位置为第9对近中着丝粒染色体中最小的一条染色体的近端部位,并证明该基因为