前言慢性疼痛是一个涉及临床多学科的常见问题,在诱发因素或原发疾病控制后可长期反复发作,严重影响患者的生活质量。慢性痛包括神经病理性痛、炎性痛及肿瘤性相关性痛等,由于机制尚不清楚,当前对慢性痛的治疗仍缺乏有效手段。最近研究提示脊髓神经炎症反应在慢性痛的发生和维持中发挥重要作用。丹参酮ⅡA(TSN ⅡA)已被证明可以通过抑制高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达而发挥其调控神经炎症反应的作用,但TSNⅡA在炎性痛中的作用尚不清楚。因此,我们建立慢性胰腺炎(CP)大鼠模型,应用行为药理学、形态学及分子生物学等方法观察TSNⅡA在炎性痛中的作用及机制。此外,在基础和临床研究中褪黑素均被证明具有抗炎和镇痛作用,但其在神经病理性痛中的作用尚无报导。因此,我们也观察了褪黑素对奥沙利铂引起的神经病理性痛的镇痛作用。总之,本研究通过观察TSNⅡA和褪黑素在炎性痛和神经病理性痛大鼠模型中的镇痛作用及机制,为以脊髓神经炎性反应为靶点的慢性痛镇痛治疗提供新的理论依据。实验一 丹参酮ⅡA通过抑制慢性胰腺炎大鼠脊髓神经炎症反应调控慢性痛的机制研究研究背景CP由于长期的胰腺外分泌炎症通常可导致严重和持续的腹痛。以前有关CP疼痛机制的研究大多数集中在外周,而中枢神经系统对这种CP疼痛的调节机制目前尚不清楚。TSNⅡA是传统中药丹参的一种活性成分,通过下调迟发性促炎因子即HMGB1的表达而实现其抗炎作用。在神经病理性疼痛的模型中,有研究指出HMGB1可以激活TLR4,进而诱导脊髓星形胶质细胞激活和释放促炎细胞因子。研究目的本研究主要探讨TSN ⅡA对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的CP大鼠痛觉传递的影响及其中枢性调节机制。研究方法通过在大鼠胰腺内注入TNBS制作CP模型。胰腺组织病理学改变通过半定量评分描述。腹部疼痛行为学通过von Frey纤维评估。通过western blot测定脊髓HMGB1的表达。脊髓促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6mRNA及蛋白的表达分别通过Real-Time PCR及western blot测定。腹腔注射TSN ⅡA或鞘内注射抗HMGB1中和抗体后,通过western blot及免疫组化测定TLR4及脊髓星形胶质细胞活化的标志物(GFAP)的表达。.研究结果TNBS注射可引起大鼠胰腺组织病理学变化,显著增加脊髓HMGB1及促炎因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达。而TSNⅡA可缓解机械触诱发痛,呈剂量依赖性的方式;并抑制TNBS诱发的这些炎症因子的表达。此外,TSNⅡA还可以显著抑制TNBS诱发的脊髓TLR4和GFAP的表达,而注射抗HMGB1中和抗体未观察到脊髓TLR4和GFAP的表达变化。研究结论我们的研究结果表明:脊髓HMGB1参与了 CP疼痛过程,这可能为我们提供一个治疗的靶点。TSN ⅡA可以通过下调HMGB1和TLR4表达缓解CP疼痛,可能是CP疼痛潜在的治疗药物。实验二 褪黑素通过抑制脊髓神经炎症反应调控奥沙利铂致痛大鼠慢性痛的机制研究研究背景作为新型铂类化疗药物,奥沙利铂在临床得到广泛使用。然而,奥沙利铂的临床使用往往伴随着一些神经病理性疼痛综合征,限制了其临床应用,目前仍然缺乏理想的治疗方法。脊髓背角神经炎症反应已被证明是是奥沙利铂致痛的一个关键因素。褪黑素作为一种吲哚胺,在基础和临床研究中均被证明具有抗炎和镇痛作用。研究目的本研究主要探讨褪黑素对奥沙利铂致痛大鼠模型的影响及其中枢性调节机制。研究方法奥沙利铂通过腹腔注射制作致痛模型。疼痛行为学通过von Frey纤维评估。褪黑素全身给药观察对奥沙利铂引起疼痛的镇痛作用。通过Real-Time PCR测定脊髓促炎因子IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和单核细胞炎性蛋白-1(MIP-1α)的mRNA改变。通过western blot及免疫组化测定脊髓星形胶质细胞活化的标志物GFAP的表达。原代细胞培养测定LPS及褪黑素对星形胶质细胞炎症介质分泌的影响。研究结果褪黑素腹腔注射明显减轻奥沙利铂诱发的机械痛敏和热痛敏阈值,而假手术组未见明显变化。整个观察中褪黑素缓解疼痛的效果至少持续至注射后3天。免疫组化和Western Blot结果显示,奥沙利铂组GFAP蛋白水平显著升高,褪黑素显著减少了奥沙利铂导致的GFAP表达的上调。奥沙利铂注射增加了脊髓背角IL-1β及TNF-α等细胞因子mRNA的表达,同时也增加了 MCP-1和MIP-1α等化学趋化因子的mRNA表达,而褪黑素能显著抑制这些炎症因子的表达。体外研究表明,脂多糖(1ug/ml)刺激显著增加原代星形胶质细胞TNF-α、IL-1β、MCP-1和MIP-1α的mRNA表达;而褪黑素(10uM和100uM)显著抑制这些炎症介质的合成,其作用呈剂量依赖性。研究结论我们的结果显示:褪黑素在化疗引起的神经病理性疼痛中具有镇痛作用,其作用可能是通过抑制星形胶质细胞释放炎症因子,调控奥沙利铂引起脊髓炎症反应而实现。