新疆维吾尔族妇女人乳头瘤病毒16型E7基因(HPV16 E7)疫苗免疫小鼠的研究

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高危型人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus)HPV感染与宫颈癌的发病密切相关。高危型HPV-E7基因是重要的转化基因,并且在宫颈癌组织中持续表达,因此E7基因是预防和治疗HPV相关疫苗的重要候选基因。本论文研究工作主要包括HPV16-E7基因的克隆、融合蛋白的原核表达、真核表达质粒免疫小鼠及其免疫效果的观察。首先,根据已知的HPV16-E7基因序列,设计特异性引物,从维吾尔族妇女宫颈癌组织DNA扩增出E7基因,将克隆到的E7基因连接到测序载体上后,通过蓝白斑筛选和酶切鉴定,确定连接的正确性。然后用DNA测序仪对该序列进行测序。确认该克隆序列与德国标准株HPV16 E7(GI:9627100)完全一致。为了得到检测小鼠抗体所需的抗原蛋白,将E7的原核表达质粒GST-2T-E7转化入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,裂解细胞后用亲和层析进行纯化,最后用SDS-PAGE进行检测,结果表明诱导表达出所需大小的融合蛋白。将克隆载体上的E7基因定向克隆到真核表达载体pCDNA3上,酶切鉴定,并将构建正确的重组质粒大量制备,免疫小鼠。为增强免疫效果,分别加入佐剂IL-2真核表达质粒(pCDNA3-IL-2)和含有CpG序列的寡核苷酸作为分子佐剂。定期收集小鼠血清,用ELISA进行检测。检测结果表明小鼠产生明显的抗E7抗体,七周时抗体水平达到最高,检测结果同时也说明IL-2基因和CpG基序做佐剂都可明显提高抗体水平。本实验从维吾尔族妇女中克隆出HPV16-E7基因,在大肠杆菌中表达纯化出GST-E7融合蛋白用于ELISA检测,用重组真核表达质粒及分子佐剂共同免疫小鼠,并产生了较高水平的专一抗E7抗体,这些为日后进一步研究HPV相关疫苗奠定了基础。
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