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副猪嗜血杆菌(Haemiophilus parasuis,HPS)于 1992 年被 Schermer 和 Ehrlich 证实是HPS病的病原,患HPS病的猪在临床上主要表现为发热、呼吸困难、跛行、关节肿大和后肢瘫痪,剖检可见大量的纤维素性多发性浆膜炎、心包炎、脑膜炎、关节炎等病理变化。在辽宁地区,HPS病已经成为仔猪发病和死亡的主要原因之一,并且成年猪也有大面积感染的现象,给养猪行业造成了非常严重的经济损失。因此,有必要对辽宁地区HPS流行株进行分离鉴定和分析,以便于为地区性的防制奠定基础。本研究自2015年4月至2016年12月,从辽宁省部分市区县,采集疑似HPS病猪的样品137份,利用细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化实验、PCR鉴定和16SrRNA序列分析及药物敏感性分析等方法进行研究。并且由于HPS具有不易培养的特性,在一定程度上影响了分离率,因此本研究还进行了培养基的优化实验,添加不同浓度的血清及NAD含量,每6h测定分离株的OD600值并绘制生长曲线,由OD600值反映不同培养时间及浓度的活菌数、生长速度等。主要结果如下:1.从收集的样品中共分离出9株HPS,分别命名为HN1512、XM1601、HC1604A、HC1604B、DD1604、YK1603、HN1604、TL1607 和 LY1611。并运用多重 PCR 检测方法,鉴定血清型,分离得到1株血清1型、3株血清7型、2株血清9型、1株血清11型和1株血清14型,且有一株HPS未测定出血清型。2.培养优化实验表明:在血清浓度为5%,NAD终浓度为10 μg/mL时,HPS生长良好。如果将NAD浓度提高到20 μg/mL时,对菌液浓度影响不大,将血清浓度增加到7%或9%时,可以使菌液浓度略有提高。3.为了解辽宁地区HPS分离株对药物敏感情况,本研究检测了 9株HPS辽宁分离株对25种药物的敏感性。结果显示:①辽宁分离株对氨苄西林、米诺环素和头孢唑啉等高度敏感,该结果能够指导临床合理用药,避免猪场损失。②同时发现辽宁分离株对一些药物存在较为严重的耐药现象,所有分离株都表现出了多重耐药,其中对药物产生最少耐受的菌株为HN1604菌株,对3种药物药物产生耐受性,而对药物产生最严重耐受性的菌株为YK1603达到对10种药物耐受。③通过PCR方法筛查HPS分离株的23种耐药基因,发现9株HPS分离株都具有耐药基因,且基因组DNA和质粒DNA分别检测出7种和9种耐药基因。耐药表型的测定结果与耐药基因检测结果基本保持一致。该研究为辽宁株HPS研究及耐药机制奠定基础。