海蜇微卫星标记的开发及应用

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wdqbupt
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
海蜇(Rhopilema esculenta Kishinouye1891)隶属于腔肠动物门、钵水母纲、海蜇属,是目前国际公认的品质最好、经济价值最高的可食用大型水母。海蜇营养结构独特,药用功效显著,深受国内外广大消费者亲睐。近年来作为大宗出口海产品,海蜇在我国出口创汇中也占有重要地位。作为传统捕捞对象,我国海蜇渔业历史悠久,20世纪七十年代,全国海蜇鲜品年捕捞量最高超过70万吨。然而,由于长期的过度捕捞和海洋环境恶化,近二十年来,海蜇自然资源急剧减少,面临枯竭的危险。据统计,到八十年代后期,全国海蜇渔业捕捞量已急剧降至10万吨左右,到2011年,全国海蜇总产量甚至不足1万吨,海蜇渔业的行业价值正逐渐丧失。引起海蜇资源枯竭的原因是多方面的,从DNA分子水平上了解海蜇种群的遗传变异水平,明确目前海蜇种质资源的状况,将为海蜇的种质资源保护、标记辅助育种、人工增养殖方案的制定以及遗传选育提供科学依据。本论文包括以下研究内容:(1)海蜇基因组微卫星分子标记的开发与群体分析:采用磁珠富集法,从海蜇基因组内筛选、设计并合成了52对引物,经海蜇群体(N=48)验证,筛选出15个具有遗传多态性的微卫星标记。15个位点共获得93个等位基因,范围在2-12之间,平均每个位点有6.2个等位基因。期望杂合度范围在0.0086-0.7055之间,平均值为0.3137;表观杂合度范围在0.0417-0.8750之间,平均值为0.3459;15个位点中有1对偏离了哈迪温伯格平衡定律(p<0.0033)。此外,连锁不平衡测试未发现位点间存在连锁不平衡。(2)海蜇转录组微卫星分子标记的开发与群体分析:从海蜇转录组文库中共挑选出83对引物,经海蜇群体(N=48)验证,最终开发出17个具有遗传多态性的微卫星标记。获得69个等位基因,范围在2-11之间,其中有15个位点等位基因数在2-6之间。期望杂合度范围在0.1180-0.5353之间,平均值为0.3568;表观杂合度范围在0.0417-0.5833之间,平均值为0.3346。通过计算平衡时P值,Bonferroni校正后发现其中有1个位点偏离了哈迪温伯格平衡定律(p<0.0029)。经过连锁不平衡检测实验结果,发现有3对位点间有连锁不平衡。(3)海蜇转录组微卫星分子标记的应用:a)海蜇转录组微卫星分子标记跨属的可转移性应用:从海蜇转录组文库里挑选出127对序列引物,合成后在沙海蜇群体(N=48)中进行扩增。结果共开发出14个多态性位点,获得42个等位基因,范围在2-4之间,期望杂合度范围是0.1333-0.7055,平均值为0.3574;表观杂合度范围是0.2979-0.7292,平均值为0.5919;有2个偏离了哈迪温伯格平衡定律(P<0.0036),有2对(RE5-RE11和RE5-RE49)位点间存在连锁不平衡。b)海蜇转录组微卫星分子标记跨目的可转移性应用:从海蜇转录组文库里挑选出127对序列引物,合成后在海月水母群体(N=48)中进行扩增。结果共开发出35个多态性位点。包括4种重复类型,其中二核苷酸有10个,以(AT)n居多;三核苷酸有23个,以(CTT)n和(GTT)n最多;四核苷酸重复、复合核苷酸重复各为一个。扩增产物大小在139-279bp之间,退火温度在48-62之间。C)海蜇转录组微卫星分子标记在沙海蜇不同地理群中的应用:将a)中自主开发的14个多态性位点,应用到山东半岛和长江口海域的两个沙海蜇野生群体中,结果表明位点均具有较好的多态性。平均观测等位基因数是4.21,平均有效等位基因数是2.03。观测杂合度范围平均值为0.2415;无偏期望杂合度平均值为0.8404。近交系数Fis平均值为0.2276。基因分化系数(Fst)值表明,两个位点属于高度遗传分化;两个位点属于中度分化;其余10个位点属于轻度遗传分化。基因分化系数平均值为0.1060,表明种群间遗传变异占总遗传变异的比例有10.60%。群体间遗传相似性系数(I)为0.8308,遗传距离(D)为0.1147。表明两个沙海蜇地理群间遗传差异程度很低,遗传相似度极高。d)采用转录组454GS FLX测序和PCR技术,以海蜇和沙蜇的基因组DNA为模板,分别克隆了包含EST-SSR和EST-SNP标记的β-连环蛋白基因目的片段。生物信息学分析显示,β-连环蛋白基因目的片段长度分别为166/169bp和157/160bp,均没有内含子。海蜇β-连环蛋白基因目的片段除了微卫星重复差异外,只有一个碱基的差异;沙海蜇除了微卫星重复差异外,其余完全一致。在海蜇和沙海蜇β-连环蛋白基因目的片段的相同位置均包含微卫星重复,但其重复单元截然不同:海蜇为:(TGC)4-6(TGT)1-2(TGC)4-5,而海蜇为(TGT)5-6。同时两物种间还存在14个单核苷酸多态位点:(T/C)1,(T/C)2,(C/T)3,(C/T)4,(C/T)5,(T/G)6,(G/C)7,(T/G)8,(A/G)9,(C/T)10,(G/A)11,(A/G)12,(C/T)13,(A/T)14。
其他文献
海洋内波在海洋中起着重要的动力学作用。而南海半封闭性强,海底地形复杂,是内潮和内孤立波多发的海域。运用观测数据和数值模拟方法对南海内波进行分析研究,意义重大。  通过
适应社会主义市场经济的发展和建立现代企业制度的需要,造就千百万与之适应的,具有独立自主的行为人格的社会主义企业家,建立和开放社会主义企业家人才市场,是中国共产党在
大型海藻多糖的降解是大型海藻生物质能源化和高值化利用的瓶颈问题,为解决该问题,本研究采用常规平板法从汕头海滨潮间带野生大型褐藻藻体分离获得10株具有降解琼胶或褐藻胶能
Activin(ACT),为激活素,属于转化生长因子β(TGF-β)家族成员,由两个β亚基构成,为一种糖蛋白激素,是作用于下丘脑-垂体-性腺轴的(HPG)关键分子。可以调控垂体类激素的分泌和卵巢中类固
党的十五大报告提出,加强党的组织建设,根本的是把党建设成坚强的领导核心,充分发挥党的组织优势。组织建设的关键是什么?是干部队伍特别是领导班子建设。十五大要求按照革
随着石油开采、大洋运输、近岸人类活动的日益增强,海洋溢油事故频繁发生,对生态环境造成重大污染,严重威胁到人类的生存环境。卫星遥感技术是一种新发展起来的研究手段,被广泛应
纪检机关是什么性质的机关,它究竟应当起什么样的作用?这个问题似乎是清楚的。可是,细究起来,特别是联系党风廉政建设、反腐败斗争和纪检工作的实践,笔者又感到是个需要很好探讨和
风输入到海洋的能量是大洋环流的重要机械能源。风是通过应力对表面地转流做功向海洋输送能量的,以动能和重力位能的形式储存在大洋中,来维持准稳态的大洋环流。已有研究发现,由
A method of detecting dry, icy and wet road surface conditions based on scanning detection of single wavelength backward power is proposed in this letter. The d
副溶血性弧菌(Vibiro parahaemolyticus)是一种常见而重要的食源性致病菌、往往通过污染水产食品造成食用者消化道感染,引起腹泻、呕吐、低烧等症状。鉴于该菌的危害,加强对该菌