吸附铅戊糖片球菌的安全性评价以及肠道微生物宏基因组分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sii923
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铅是一种长时间不被环境降解的重金属元素,通过食物链蓄积微量就会对人身体造成不可逆的危害,它的污染是食品安全热点问题之一。使用食品级乳酸菌吸附重金属比传统的方法更加简单、高效并且无二次污染,但一株无安全食用历史的乳酸菌应用于食品中就必须进行安全性评价。本研究通过对前期课题组筛选的具有吸附铅能力的4株戊糖片球菌进行体外安全试验;对筛选出安全性最高的菌株10-a-1进行毒理学试验;同时分析菌株10-a-1进入宿主肠道后对宿主肠道微生物群落和功能的影响以及试验组与对照组肠道微生物群落和功能的差异,为菌株10-a-1在吸附重金属领域的应用提供基础。本文测定了前期从内蒙古自治区包头市分离、筛选的具有耐受铅能力的4株戊糖片球菌的生长曲线,并通过吸附Pb2+能力测定,得出4株戊糖片球菌对铅吸附率在81.90-90.95%之间。对4株戊糖片球菌进行体外安全性试验,在有害代谢产物试验中,4株菌在氨基酸脱羧酶(赖、酪、组、鸟氨酸)均为阴性;菌株F-e-3的吲哚试验、硝酸盐还原酶试验为阳性;菌株10-a-1无将精氨酸分解为精胺的能力,并且不产生D-乳酸;明胶液化试验表明4株菌均不具备明胶液化能力;耐药性试验结果表明4株菌对红霉素中度敏感,对其余7中抗生素为耐药并且均无质粒;溶血试验结果表明菌株9-b-1有β-溶血作用。总之,体外安全性试验评价结果表明只有戊糖片球菌10-a-1是最安全的菌株。对安全性最高的戊糖片球菌10-a-1进行毒理学试验,在7 d小鼠急性毒性试验中采用上-下限量法,灌胃计量采用6.667 mg/g·BW的菌液经口灌胃,小鼠中枢神经系统及躯体运动、自主神经系统等均无异常,无细菌转移风险且试验组与对照组小鼠在进食量、脏体比(心、肾、脾、肝)、血生化指标(γ-GD、ALT和AST)和肠(结肠、盲肠、回肠)形态方面无显著差异,确定6.667 mg/g·BW为无毒剂量。遗传毒性中采用默认计量梯度系数为3.2,高、中、低剂量组分别为6.667、1.850、0.583 mg/g·BW进行经口灌胃结果显示,在小鼠的精子畸形试验和骨髓嗜多染红细胞微核试验的试验组与阴性对照组既无无显著性差异也无计量-反应关系,表明戊糖片球菌10-a-1无致小鼠生殖细胞和骨髓细胞畸形的能力。28 d经口毒性试验中,小鼠的生产性能、脏体比(心、肾、脾、肝)、血生化指标(γ-GD、ALT和AST)和肠(结肠、盲肠、回肠)形态方面无显著差异且无计量-反应关系。通过对灌胃戊糖片球菌10-a-1的试验组与生理盐水组各3只雄性小鼠粪便进行宏基因组学分析,结果表明试验组与对照组肠道微生物在门水平上4个时期的厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门、脱铁杆菌门、变形菌门的相对丰度均位于前top5。试验组与对照组肠道宏基因组功能类别处于前top3的为碳水化合物代谢、氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢。试验组拟杆菌门丰度相比对照组随着灌胃天数的增加有增长趋势,而试验组厚壁菌门丰度相比对照组随着灌胃天数的增加有减少趋势,试验组与对照组肠道微生物在属水平上有15个属存在显著性差异。在功能方面,基于LEf Se分析显示共20个MAP、18个GO、12个CAZy在试验组与对照组中存在显著差异,E4时期KEGG功能中有差异的通路相比于其他时期最多。
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