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目的通过对兔VX2肝癌模型实施肝动脉化疗栓塞术(Transarterial Chemoembolization,TACE),研究肝癌糖酵解相关蛋白表达的变化,包括缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、葡萄糖转运蛋白1(Glucose transporters 1,GLUT1)、己糖激酶2(Hexokinase 2,HK2)、丙酮酸激酶M2(Pyruvate kinase M2,PKM2)及乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA),以期为肝细胞癌新的治疗策略提供基础研究支撑及参考。方法(1)VX2模型建立:挑选新西兰白兔30只,不论雌雄,空腹体质量2–3 kg,均为清洁级。采用随机数表法选取2只种植成后腿荷瘤兔,2周后取出瘤组织制成1mm~3小瘤块备用,选取20只兔开腹穿刺肝左叶种植小瘤块后关腹,剩余8只开腹暴露肝脏后不作任何处理关腹。瘤块植入后14 d上腹部超声、CT及MRI证实20只兔中有16只为单发肿瘤,d=1.5-2.2 cm,符合HCC的影像表现。其余4只肿瘤d>3 cm,排除实验。(2)实验分组:采用“随机数表法”将16只建模成功的兔分为肝癌假手术组即Sham组(n=8)和TACE组(n=8),开腹后不作任何处理的兔为正常对照组即NC组(n=8)。瘤块植入后15 d行经肝动脉化疗栓塞术(TACE),NC组和Sham组经导管于肝左动脉注入0.2 ml/kg生理盐水,TACE组经同样方法注入2mg/kg吡柔比星+0.2ml/kg碘油混合乳剂。(3)术后影像学及实验室评估:瘤块植入后18 d行CT平扫复查肝脏肿瘤形态。麻醉处死3组实验兔,NC组取正常肝组织,Sham组及TACE组取肝左叶肿瘤,其形态用HE染色观察。Western Blot检测肝肿瘤及正常肝组织HIF-1α、VEGF、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA糖酵解相关蛋白表达情况。结果(1)VX2模型建立:种植后14 d超声证实2只荷瘤兔双侧后腿均形成肿瘤。肝脏种植后14 d超声证实20只兔中有16只为单发结节状低回声,d=1.5-2.2 cm,边界较清,瘤周血流丰富,其余4只结节d>3 cm;CT平扫+增强证实16只兔肝左叶单发低密度肿块,边界清晰,增强扫描肿瘤于动脉期先呈明显环形强化,门脉期肿瘤密度迅速下降,延迟期进一步下降;MRI检查证实16只兔肝左叶单发结节状异常信号影,T2WI-fs序列呈均匀高信号,DWI提示弥散受限,ADC图信号明显减低,测得ADC值下降,考虑为HCC。(2)肝动脉化疗栓塞术:瘤块植入后15 d于TACE术中DSA造影见:Sham组和TACE组肝左动脉分支增多、紊乱,肿瘤血供来自肝左动脉分支,呈球形染色,边界清晰。TACE组注入吡柔比星+碘油混合乳剂后可见肝左动脉血管铸型,分支消失,碘油均匀沉积于瘤灶内。(3)术后影像学及实验室评估:瘤块植入后18 d上腹部CT平扫见Sham组瘤灶密度较术前变化不大,TACE组肝左叶肿瘤瘤灶内碘油均匀、致密沉积。HE染色显示Sham组可见致密的肝癌细胞均匀分布,TACE组可见大片坏死肿瘤细胞及破裂、淡染之细胞质。Western Blot检测显示Sham组HIF-1α、VEGF、GLUT1及糖酵解关键酶PKM2、LDHA蛋白表达明显高于NC组,差异有统计学意义(P=0.014;P=0.022;P=0.044;P=0.035;P=0.022;P=0.002);TACE组HIF-1α、VEGF、GLUT1及糖酵解关键酶HK2、PKM2、LDHA蛋白表达明显高于Sham组,差异有统计学意义(P=0.002;P=0.001;P=0.025;P=0.002;P=0.029;P=0.018)。结论1、兔VX2肝癌模型较兔正常肝组织HIF-1α、VEGF、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA蛋白表达升高。2、TACE术后肝癌HIF-1α、VEGF、GLUT1、HK2、PKM2、LDHA蛋白表达较术前进一步升高,提示术后肝癌缺氧加重,可能进一步促进肝癌血管新生、葡萄糖摄取及有氧糖酵解代谢增快。