论文部分内容阅读
目的：本文以达那唑诱导的雌性性早熟大鼠为模型,通过观察调控青春期发育的关键分子下丘脑Kiss-1基因衍生肽kisspeptin及其受体GPR54 (G-protein couped receptor 54)在青春期发育不同时期的表达规律,探讨kisspeptin/GPR54在青春启动时的作用；观察中药抗早颗粒对kisspeptin/GPR54表达的影响以及kisspeptin/GPR54在抗早颗粒治疗性早熟中的作用,进一步认识抗早颗粒的作用机制；抗早颗粒治疗特发性中枢性性早熟女童临床疗效观察,研究抗早颗粒对性早熟女童雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、胰岛素样生长因子(IGF-1)的影响,以及抗早颗粒改善性早熟女童的中医证候优势,探讨抗早颗粒的作用机制;评价抗早颗粒治疗本病的临床经济学意义。方法：(1)出生后3天的SD雌性大鼠,随母鼠共同饲养,随机分为正常对照A组(青春前期)、正常对照B组(青春早期)、实验A组(青春早期)、实验B组(青春中期)。实验组大鼠在出生后5日龄给予皮下注射300ug达那唑。采用荧光定量PCR技术分别观察青春期启动前(出生后23日龄)、青春期启动(阴门开启为标志)、青春期启动后(建立2个规则的性周期)大鼠下丘脑Kiss-l/GPR54mRNA的表达规律。(2)出生后3天的SD雌性大鼠,随母鼠共同饲养,随机分为正常组、模型组、曲普瑞林组、中药组(大剂量组、中剂量组、小剂量组),每组6只。模型组、曲普瑞林组和中药组大鼠在出生后5日龄给予皮下注射300ug达那唑。曲普瑞林组大鼠15日开始用曲普瑞林100ug/kg,皮下注射,1次/日,同时中药组灌胃中药,1次/日,大剂量60m1/kg,中剂量30ml/kg,小剂量15ml/kg。同时模型组给予生理盐水1ml/只灌胃。模型组大鼠建立第一个发情期后于动情前期将该动物处死,其余各组按1：1比例同时处死。计算卵巢指数和子宫指数,观察卵巢组织切片黄体的出现情况,ELISA法测定血清E2、LH、IGF-1水平,荧光定量PCR技术测定大鼠下丘脑GnRH/GnRH-RmRNA、Kiss-1/GPR54mRNA的表达变化,探讨抗早颗粒对Kiss-1/GPR54mRNA表达的影响及抗早颗粒治疗性早熟的作用机制。(3)临床观察将特发性中枢性性早熟女童随机分2组,中药组62例,西药组31例。中药组口服抗早颗粒每日1剂,温水冲100ml,分2次口服,连服6个月；西药组肌肉注射盐酸曲普瑞林(达菲林),按60-100ug/kg,28天1次,连续6个月。观察治疗前后两组的疗效,研究抗早颗粒改善性早熟女童的中医证候的优势,分析抗早颗粒对性早熟女童LH、FSH、E2、IGF-1的影响,以及性早熟女童体重指数(BMI)与E2、IGF-1的相关性,探讨抗早颗粒的作用机制；评价抗早颗粒治疗本病的临床经济学意义。结果：(1)实验组5日龄雌性大鼠皮下注射达那唑后,阴门开启和建立两个规则的性周期时间明显提前,卵巢和子宫的脏器指数较正常对照A组大鼠明显增加；青春期启动时下丘脑GnRHmRNA的表达水平较正常对照A组显著升高。正常对照A组(正常青春前期)、模型A组(青春期早期)、模型B组(青春期中期)的Kiss-1mRNA和GPR54mRNA的表达逐渐增高,提示Kiss-1/GPR54mRNA的表达与生长发育的各个时期密切相关。同时观察到青春期启动时正常大鼠下丘脑Kiss-1/GPR54mRNA表达增加,与GnRH的增加趋于同步。(2)观察到抗早颗粒可以降低性早熟模型大鼠血清E2、LH、IGF-1水平,治疗前后有非常显著性差异(P<0.01)。荧光定量PCR技术观察到中药高、中、低剂量组、曲普瑞林组大鼠下丘脑GnRH、Kiss-1及GPR54 mRNA含量明显降低,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。表明抗早颗粒可下调性早熟模型大鼠下丘脑Kiss-1、GPR54及GnRHmRNA的表达。(3)临床观察中药组有效率达83.87%,西药组有效率87.09%,两组疗效无显著性差异(P>0.05),中药组与西药组疗效相当；两组治疗后显著降低患儿血清FSH, LH及E2水平,子宫卵巢明显回缩,第二性征消退。中药组可显著改善性早熟女童形体偏胖、面赤口渴、肢体困倦、大便干结等中医证候,与西药组比较,有显著性差异(P<0.05)。(4)临床经济学评价,成本-效价比中药组显著优于西药组。结论：(1)性早熟大鼠青春期启动时kisspeptin/GPR54的表达异常,下丘脑Kiss-1/GPR54 mRNA的表达水平增高,可能参与并促进大鼠下丘脑-垂体-性腺轴(HPGA)的提前启动,导致大鼠性早熟的发生。(2)抗早颗粒可通过下调下丘脑Kiss-1/GPR54mRNA的表达,抑制GnRH的释放,延缓性早熟大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的启动。(3)抗早颗粒临床与曲普瑞林疗效相当,可能对性早熟患儿下丘脑-垂体-性腺轴功能有抑制作用。成本-效价比中药组显著优于西药组,显示抗早颗粒中药有进一步研究开发推广的价值。