沾化冬枣(Ziziphus jujuba Mill.)是鲜食枣果中的珍品,作为我国特有的晚熟鲜食果品,具有很高的营养价值和市场开发前景。然而,沾化冬枣成熟期集中,贮藏期短,常温下仅能保存6-7天;利用常规储藏方法,果实出库后品质不佳,货架期也只有3-5天。因此,如何在保持果实鲜食品质的前提下延长贮藏期,成为果树遗传改良中亟待解决的问题之一。冬枣属于高呼吸强度的非跃变型果实,ABA对其后熟及贮期衰老起着非常重要的作用,影响枣果后熟过程中各类酶活性和果实贮藏物质的降解速率及硬度,是导致枣果变软衰老的启动因素。因此,通过反义基因技术组织特异性的降低ABA合成强度有可能延长枣果采收期和贮藏保鲜期。然而,有关沾化冬枣遗传工程的研究未见报道。本工作主要研究内容有二,一是将ABA合成途径中关键酶基因重组到植物表达载体,二是建立沾化冬枣遗传转化体系,为利用反义基因技术延长枣果采收期和贮藏保鲜期的工作奠定基础。 ZEP基因和NCED基因是ABA合成途径中的关键酶基因。在第一部分工作中,将本实验室克隆的来自盐芥(Thellungiella halophila)的ZEP基因和NCED基因分别重组到质粒pCAMBIA1300-als的KpnI位点,并分别获得了含有目基因正、反向插入的植物表达载体pCAMBIA1300-ZEP(+)-als、pCAMBIA1300-ZEP(-)-als、pCAMBIA1300-NCED(+)-als和pCAMBIA1300-NCED(-)-als,并转入根癌农杆菌LBA4404中。用携带上述质粒的农杆菌转化了烟草叶盘,在加有选择剂的培养基上获得转化植株。对转化植株进行PCR检测和Southern杂交鉴定,证明外源基因已整合到烟草基因组。并为鉴定盐芥ZEP基因和NCED基因的功能准备了材料。 建立遗传转化体系是利用基因工程改良作物的基础,本工作以沾化冬枣组织培养苗茎尖为受体,通过农杆菌介导法,将来自大肠杆菌的胆碱脱氢酶基因betA和来自拟南芥的乙酰乳酸脱氢酶突变基因als导入冬枣细胞,获得了转化小苗。在此基础上,研究了农杆菌悬浮液浓度、浸染时间、共培养时间和真空渗入处理