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晶状体上皮细胞（Lens epithelial cells，LECs）担负着晶状体的生长，分化以及损伤修复的物质和能量代谢的任务，晶状体上皮细胞的凋亡被认为是除了先天性白内障以外的所有类型白内障形成的细胞学基础。氧自由基的损伤与老年性白内障的发病关系密切，H2O2是白内障形成的一个重要致病因素。早期对凋亡的观点一直认为细胞核是调控凋亡的中心，并且细胞超微结构分析也认为凋亡细胞线粒体的形态可一直维持不变直至到细 晰仁大李医李优眼科李硕士母位伦大—伦人摘要乡澎‘夕年夕月胞降解的最后阶段。但是近年的研究发现，不同凋亡途径都是通过作用于线粒体膜来决定凋亡是否发生，线粒体在细胞凋亡乃至细胞死亡的过程中均发挥着关键性的作用。因此人们对于凋亡的认识开始由细胞核为中心的调控模式转变微以线粒体为中心的调控模式。 线粒体结构和功能的改变是凋亡的关键性环节，其中线粒体跨膜通透性改变（mitoehondrial permeabi一ity transition，MPT）最为重要，在各种致凋亡因子的刺激下，线粒体跨膜通透性转运孔（mitoehondria一permeability transition pore，MpTp）开放，使MpT发生改变，并由此引起线粒体跨膜电位（△甲m）降低和AIF、细胞色素C等促凋亡物质释放等一系列变化，最终导致染色质浓集、DNA核小体间断裂等典型凋亡表现。由于在凋亡过程中，MPTP的开放处于MPT发生改变的上游，因此研究清楚MPTP在凋亡过程中的作用及其调控机制，对研究细胞凋亡的机制将有非常重要的意义，并为研究细胞凋亡的治疗提供理论基础。本研究旨在通过研究晶状体上皮细胞氧化损伤产生凋亡时，细胞线粒体跨膜通透性转运孔发挥的作用，来进一步阐明晶状体细胞氧化损伤环节，丰富细胞损伤理论。进而为临床防治提供理论依据。【研究目的】 研究晶状体上皮细胞线粒体在细胞凋亡过程中的作用。通过预先阻断兔晶状体上皮细胞的线粒体跨膜通透性转运孔，观察其对过氧化氢诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡过程的影响，包括对细胞超微结构的变化、线粒体功能和细胞凋亡率的改变，从而探讨其对晶状体上皮细胞凋亡的调控作用。【研究方法】 环抱霉素A（cyclosPorineA，CsA）是目前最有效的线粒体PT孔专一抑制剂，通过一定浓度的环抱霉素A阻断线粒体PT孔是目前研究线粒体PT孔是否参与细胞死亡调控的主要手段。所以，我们选用不同浓度的环抱霉素A预处理细胞，对细胞线粒体PT孔进行阻断。一3一晰卜大李医母陇味科母硕士母位伦我—论大摘要自笼冲年夕月 我们首先对家兔晶状体上皮细胞进行原代和传代培养，用0.lmmol.L一’的过氧化氢处理细胞2h，建立并稳定氧化损伤模型:应用不同浓度的环抱霉素A预处理细胞30分钟，从不同程度上阻断细胞线粒体PT孔（预实验已证实所选浓度的环抱霉素A中的DMSO对正常培养的晶状体上皮细胞无损伤作用）。再加入终浓度为0.lmmol.L一’过氧化氢作用2小时后，分别用咪哩蓝（MTT）法测定LECS的线粒体的功能;流式细胞仪 AnnexinV一PI荧光标记双染色法测定LECs的凋亡率的变化;透射电镜观察细胞线粒体及超微结构的改变。【研究结果】 应用o.lmmol.L一，的过氧化氢处理细胞2h后，细胞线粒体功能明显降低（尸<0.01，n=3）;AnnexinV一PI染色流式细胞仪检测凋亡细胞占（26.4士1.7）%显著多于对照组的（l .65士0.7）%（尸<0.01，n=3）;电镜显示LECs呈典型的凋亡形态。经浓度当林mol.L一’且<40林mol.L一’的环抱霉素A预处理后的细胞，再用过氧化氢处理，较之未经预处理组的细胞，其细胞线粒体功能有不同程度的恢复（与HZO:对照组比较，p<0.05，n二3）;细胞凋亡率明显降低（与HZO:对照组比较，P<0.05，n=3）;细胞线粒体等超微结构改变轻微。【研究结论】 1.一定浓度的环抱霉素A可以抑制过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞的损伤。2.线粒体跨膜通透性孔参与了过氧化氢诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡的调控。