论文部分内容阅读
目的：
糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的严重眼部并发症之一,最新的研究表明,眼部组织具有独立合成肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的能力,而且RAS参与了DR的发生发展。我们通过建构糖尿病动物模型,观察分析AngⅡ和VEGF在糖尿病视网膜病变大鼠中的表达及其相互关系,探讨AngⅡ与DR发生发展的关系。
方法：
健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠90只,随机分为两组,正常对照组(NC)和糖尿病组(DM),每组45只。DM组按60mg/kg剂量,一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)造成大鼠糖尿病模型;NC组注射同等剂量的柠檬酸缓冲液。建模成功后,分别于4、8、12w各处死糖尿病组及正常对照组大鼠15只,制作视网膜组织切片并采用HE染色法观察视网膜形态学改变,采用免疫组织化学法检测视网膜血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在各组大鼠视网膜内的定位表达,采用Western blot检测视网膜AngⅡ和VEGF蛋白的表达,采用Real-time PCR测定视网膜AngⅡ mRNA和VEGF mRNA的表达。.采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析,采用单因素方差分析、Nemenyi法检验和Pearson相关分析进行统计学分析,以P＜0.05作为差异具有统计学意义。
结果：
1、一般观察:糖尿病组大鼠呈现明显多尿、多饮、多食,明显消瘦、弓背,精神逐渐萎靡,毛皮污秽无光泽,早期多动,后期反应迟钝,生长缓慢,血糖波动在较高水平＞(16.7mmol/L)。
2、视网膜光镜形态学观察:糖尿病4w组与正常组相比较无明显改变;糖尿病8w组视网膜节细胞层及内外核层细胞排列紊乱;糖尿病12w组可见视网膜节细胞层及内核层水肿,细胞排列紊乱。
3、免疫组织化学结果显示:正常组与糖尿病组大鼠组视网膜神经节细胞层、内核层均有AngⅡ和VEGF阳性表达,糖尿病组大鼠阳性表达更为明显。
4、Western blot结果显示:正常组与糖尿病组大鼠视网膜中均有AngⅡ蛋白表达,组间比较差异有统计学意义(F=4357.00,P=0.00)。AngⅡ蛋白在正常对照组视网膜中表达微弱,而在糖尿病模型组视网膜中表达显著上调,与正常对照比较差异有统计学意义(P=0.00);正常组与糖尿病组大鼠视网膜中均有VEGF蛋白表达,组间比较差异有统计学意义(F=2428.00,P=0.00)。VEGF蛋白在正常对照组视网膜中表达微弱,而在糖尿病模型组视网膜中表达显著上调,与正常对照比较差异有统计学意义(P=0.00);经Pearson相关分析,在糖尿病视网膜病变中,AngⅡ和VEGF蛋白的表达呈明显正相关(r=0.83,P=0.00)。
5、Real-time PCR结果显示:正常大鼠视网膜有.AngⅡ和VEGF的表达,NC4、8、12w各组间多重比较差异无统计学意义(P＞0.05)。在各时间点(4w、8w、12w),DM组与NC组相比视网膜组织AngⅡ和VEGF表达上升(P＜0.05),各组间多重比较差异有统计学意义(P＜0.05);经Pearson相关分析,在糖尿病视网膜病变中,AngⅡ mRNA和VEGF mRNA的表达呈明显正相关(r=O.81,P=0.00)。
结论：
1、在糖尿病大鼠模型下,视网膜形态学明显改变在患病后8w即可发生。
2、AngⅡ和VEGF明显表达于视网膜神经节细胞层及内核层细胞。
3、AngⅡ和VEGF的蛋白表达在糖尿病4-12w表达逐渐升高,至12w达到峰值。
4、AngⅡ mRNA和VEGF mRNA在糖尿病4-12w表达逐渐升高,至12w达到峰值。