论文部分内容阅读
本文设计、合成了一系列含2,6-二苯并咪唑吡啶的钌(Ⅱ)混配配合物,对其体外抗肿瘤活性进行了筛选,并深入探讨了诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导通路。主要研究结果如下:1.合成了两个含2,6-二苯并咪唑吡啶的配体,两个配合物中间体,十个钌(II)多吡啶配合物,并采用ESI-MS、ICP和1H NMR等方法对其结构进行了表征。2.选择多种人体肿瘤细胞株和正常细胞株,采用MTT法筛选了配合物的体外抗肿瘤活性。结果显示配合物均能不同程度的抑制肿瘤细胞的生长,并且对肿瘤细胞具有选择性。其中,与硒二唑配体混配的配合物抗肿瘤活性最高,混配配体中含有供电子基团(如甲基)可以增强配合物的抗肿瘤活性,而含有吸电子基团(如硝基)则会降低配合物的抗肿瘤活性。3.流式细胞术分析的结果表明诱导肿瘤细胞凋亡是所合成配合物最主要的作用机理。Caspase活性分析的结果表明配合物通过线粒体通路和死亡受体通路共同诱导肿瘤细胞发生凋亡。荧光显微镜实时观察药物作用下线粒体的情况、Western Blotting法检测细胞内Bcl-2蛋白家族的表达水平以及JC-1荧光探针检测线粒体跨膜电位耗散的结果表明线粒体功能失调在诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥了重要作用。最后,DHE荧光探针检测配合物作用后细胞内O2-水平的结果表明O2-随着药物浓度的增大和作用时间的延长而升高。4.采用单细胞凝胶电泳法、荧光免疫检验法、UV-Vis光谱法、荧光光谱法和粘度法表征了配合物和肿瘤细胞DNA的相互作用情况,结果表明配合物通过插入作用诱导肿瘤细胞DNA损伤,从而激活p53信号通路,进而诱导线粒体功能失调,最后导致肿瘤细胞凋亡。综上所述,本文合成了十个含2,6-二苯并咪唑吡啶的钌(Ⅱ)混配配合物。其中,与硒二唑配体混配的配合物抗肿瘤活性最高,具有特异的选择性细胞毒性,混配配体中含供电子基团(如甲基)可以增强配合物的抗肿瘤活性,而含有吸电子基团(如硝基)则会降低配合物的抗肿瘤活性。配合物可以通过插入作用诱导肿瘤细胞DNA损伤,激活p53信号通路,进而通过死亡受体通路和线粒体通路共同诱导肿瘤细胞凋亡,同时伴随有细胞内O2-含量的升高。因此,具有潜在的应用开发前景,可作为候选化学药物进行深入的临床前抗肿瘤研究。