附睾是连接睾丸和输精管的高度卷曲的管道，主要由附睾管组成，大体分为头、体、尾三部分。睾丸中形成的精子已完成数量上的增加、特性上的分化、遗传物质的再分配以及结构形态的变化，但尚缺乏自主的前向运动能力和受精能力。进入附睾中的精子，DNA已经浓缩，不再具有或很少有转录活性，其运动能力和受精能力的获得认为完全是在附睾提供的微环境中进行的。由于附睾各部分上皮细胞的特异性分泌和选择性重吸收，使得附睾液中的成分处于连续动态变化中。精子在附睾运行过程中与附睾液相互作用，被认为与精子逐步成熟密切相关。 蛋白质组学技术为研究附睾蛋白提供了有效手段。目前，许多学者对马、猪、大鼠等附睾管腔液中的蛋白及附睾分泌蛋白进行了研究；而对附睾组织本身蛋白表达情况研究较少。 目的：为了从蛋白质水平研究附睾的生理机能，我们应用双向凝胶电泳和质谱技术展示人附睾组织的蛋白质表达情况，并且差异分析人附睾头、体、尾之间特异表达的蛋白。 方法：液氮研磨附睾组织，利用蛋白提取裂解液分别提取人附睾总蛋白以及附睾头、体、尾的蛋白，Bradford法测定蛋白浓度；然后利用双向凝胶电泳(2-DE)分别分离样品蛋白：第一向采用固相pH梯度(pH3～10)胶条等电聚焦，第二向采用12﹪SDS-PAGE分离，上样量分别为80ug(用于银染)和500ug(用于考染);电泳结束后，通过ImageScanner扫描仪进行图像扫描，采用ImageMaster2D-Elite3.01图像分析软件对采集图像进行图像分析，包括斑点检测、附睾头、体、尾的图谱的差异分析；利用MALDI-TOFMS，采用肽质量指纹谱(PMF)的方法鉴定2D凝胶上的蛋白；对鉴定结果进行生物信息学分析。 结果：(1)应用双向电泳技术，获得了染色背景较好、分辨率较高的人附睾总蛋白的电泳图谱；经软件分析，分别从银染、考染的凝胶图谱上识别到1878和1362个蛋白点，胶上的点主要分布在pI4～8、Mr10～75kDa的区域；利用质谱，鉴定出427种附睾表达的蛋白，它们代表了胶上700多个点。 (2)利用生物信息学，对这些蛋白的分子量、等电点、亚细胞定位、功能分析显示：分子量分布在10～70kDa之间的蛋白占90.2﹪，Mr＜10kDa和Mr＞100kDa的蛋白分别占2.3﹪和2.6﹪；pI＜9和pI＞9的蛋白分别占94.6﹪和5.4﹪；这些蛋白大部分定位在细胞质、线粒体和细胞核中，而定位细胞膜上的蛋白质只有4种(1.4﹪)；蛋白功能分类中，酶成分最多，占38.5﹪(143种)，其次是细胞骨架结构蛋白(14.8﹪)、结合/载体蛋白(11.6﹪)、信号分子(9.7﹪)、合成代谢目关蛋白(8.1﹪)和分子伴侣/热休克蛋白(5.9﹪)等。 (3)获得了较高质量的人附睾头、体、尾组织蛋白的双向电泳图谱(考染)，经软件分析，共有72个点在附睾头、体、尾之间有显著差异;质谱鉴定出31种蛋白代表了图谱上38个差异的点。按功能大体分成了参与基础代谢类、参与氨基酸代谢类、抗氧化作用类和参与平滑肌组织构成等五类。大部分差异蛋白表达的部位与该段附睾预期的功能相一致。 结论：(1)我们首次利用蛋白质组学技术，对人附睾组织的蛋白表达情况进行了研究。利用双向电泳，得到了高质量的电泳图谱；利用MALDI-TOF质谱仪，鉴定出427种附睾表达蛋白。这为深入研究附睾功能提供了重要的线索。 (2)结果分析显示，双向电泳对大分子量蛋白、极酸或极碱蛋白、高疏水性蛋白(膜蛋白)的分离效果较差，但仍然是目前用于蛋白质组学研究最有效的分离手段。 (3)差异蛋白质组学研究方法有助于阐明附睾各部分的生理功能，这些差异蛋白在附睾中的作用值得进一步研究。