论文部分内容阅读
目的: 采用自制改良Allens垂直坠落打击器建立大鼠脊髓损伤（Spinal cord injury, SCI）.模型，观察热量限制(Caloric restriction，CR)对大鼠急性脊髓损伤(Acute spinal cordinjury,ASCI)后脊髓神经细胞凋亡及血清炎性因子的影响，从抗凋亡、抗炎方面初步探讨CR对ASCI的神经保护作用及其可能机制。为CR用于临床治疗SCI提供实验依据。 方法: 将48只雌性成年Wistar大鼠，随机分成CR组（A组，n=16）、正常饮食对照组（B组，n=16）、假手术组（C组，n=16）。A组、B组采用自制改良Allens垂直坠落打击器法建立大鼠胸段脊髓损伤模型，C组仅切除椎板，不损伤脊髓。A组于术后立即给予限制饮食摄入（正常饮食的60％），B组及C组给予正常饮食。分别于伤后6h、1d、3d、7d处死大鼠，采用经心脏采血取血清后取损伤段脊髓组织行石蜡切片，通过苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色来观察脊髓组织结构变化，并通过免疫组化检测（SP法）观察凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达情况;通过双抗体夹心酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)法检测各组大鼠血清中炎性因子白介素-6(Interleukin-6，IL-6)、白介素-10(Interleukin-10，IL-10)及肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)的含量。结果用SPSS19.0进行统计学分析。 结果: 1.HE染色结果:脊髓损伤后，A、B两组脊髓组织结构紊乱，灰白质界限欠清，均可见明显出血灶、炎性细胞浸润及空洞形成，可见神经细胞变性坏死，与B组相比，A组经CR干预后其充血水肿程度较B组轻，变性坏死之神经细胞相对较少。C组脊髓组织切片结构完整清晰。 2.免疫组化结果: 2.1 Caspase-3:A、B两组Caspase-3阳性表达较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，损伤局部即启动凋亡机制;A、B两组Caspase-3阳性表达均呈下降趋势，两组同期比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但A组1d后下降趋势较B组明显，推测CR可抑制Caspase-3的表达，可能存在远期效应; 2.2 Bax、Bcl-2:A、B两组Bax阳性表达较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，损伤局部即启动凋亡机制;A、B两组Bax阳性表达均呈先升后降趋势，两组同期比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但A组3d后下降趋势较B组明显，推测CR可抑制Bax的表达，可能存在远期效应。A、B两组Bcl-2阳性表达较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，损伤局部即启动抗凋亡机制;A、B两组Bcl-2阳性表达均呈上升趋势，且A组Bcl-2阳性细胞数高于B组同期，差异有统计学意义(P＜0.05)，推测CR可促进Bcl-2的表达。 3.血清TNF-α、IL-6、IL-10含量ELISA检测结果: 3.1 IL-6:A、B两组血清中IL-6含量较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，机体启动炎性机制;A、B两组IL-6含量均呈先升后降趋势，且A组3d和7d时IL-6含量明显低于B组，差异有统计学意义(P＜0.05)，推测CR可抑制IL-6的表达; 3.2 IL-10:A、B两组血清中IL-10含量较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，机体启动抗炎机制;A、B两组IL-10含量均呈上升趋势，两组同期比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但A组上升趋势较B组明显，推测CR可促进IL-10的表达，可能存在远期效应; 3.3 TNF-α:A、B两组血清中TNF-α含量较C组均明显升高，提示脊髓损伤后，机体启动炎性机制;A组TNF-α含量呈下降趋势，而B组TNF-α含量呈上升趋势，两组同期比较差异有统计学意义（P＜0.05），推测CR可抑制TNF-α的表达。 结论: 1.热量限制可通过促进凋亡抑制因子Bcl-2的表达，抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡，有益于神经功能的保护; 2.热量限制可通过降低血清中的炎性因子IL-6及TNF-α的含量，抑制急性脊髓损伤后的炎性反应，减轻继发性脊髓损伤，促进神经功能的恢复。