【摘 要】
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目的探讨神经元限制沉默因子(REST)以及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对视网膜干细胞(RPC)增殖和分化的影响及其作用机制,以期为基于干细胞的细胞替代疗法治疗视网膜退行性病变
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目的探讨神经元限制沉默因子(REST)以及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对视网膜干细胞(RPC)增殖和分化的影响及其作用机制,以期为基于干细胞的细胞替代疗法治疗视网膜退行性病变提供新的思路。方法1.分别用REST小干扰RNA(si REST)、全反式维甲酸(RA)和IGF-1处理RPC,在增殖条件下用CCK8、q PCR、免疫蛋白印迹和免疫细胞化学法等检测REST、RA及IGF-1对视网膜干细胞增殖能力及干性维持的影响。2.分别用si REST和RA处理RPC,在分化条件下培养7天,用q PCR、免疫蛋白印迹和免疫细胞化学法等检测REST和RA对视网膜干细胞分化的影响,并进一步探讨其机制;在增殖条件下IGF-1预处理RPC 3天,再用分化培养液培养7天,免疫蛋白印迹和免疫细胞化学法等检测IGF-1对视网膜干细胞分化的影响。结果1.在增殖条件下,REST在RPC中高表达。敲低REST的表达或添加RA能够抑制RPC增殖,且RA对RPC增殖的调控是(部分)通过影响mi R-29a的表达和蛋白酶体降解途径,从而调节REST的表达来实现的;IGF-1能够维持RPC的干性并明显促进RPC的增殖。2.分化条件下,REST随着RPC分化逐渐降低,转染si REST或添加RA能够促进RPC向β3-tubulin、rhodopsin和recoverin阳性的视网膜神经元细胞分化,且RA对RPC分化的调控是(部分)通过影响mi R-29a的表达和蛋白酶体降解途径,从而调节REST的表达来实现的;IGF-1预处理能够明显促进RPC向视网膜神经元细胞分化。结论1.REST、RA及IGF-1在RPC增殖中发挥了重要作用。敲低REST的表达、添加外源性RA能够明显抑制RPC的增殖,并且RA是通过部分调节REST的表达来调控RPC的增殖;添加外源性IGF-1能够明显促进RPC的增殖。2.REST、RA及IGF-1在RPC的分化中具有重要的调控作用。敲低REST的表达、添加外源性RA,能够明显促进RPC的分化,且RA是通过部分调节REST的表达来调控RPC的分化;IGF-1的预处理能促进RPC向视网膜神经元细胞分化。这些结果提示REST、RA及IGF-1在治疗视网膜退行性病变中有潜在的临床应用价值。
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