【摘 要】
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抗磷脂抗体综合症(Antiphospholipid antibody syndrome,APS)是一类累及多器官、系统的自身免疫性疾病,它的临床主要表现是动静脉血栓、自发性流产和血小板减少,除此之外目前将抗
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抗磷脂抗体综合症(Antiphospholipid antibody syndrome,APS)是一类累及多器官、系统的自身免疫性疾病,它的临床主要表现是动静脉血栓、自发性流产和血小板减少,除此之外目前将抗磷脂抗体(Antiphospholipid antibody,APA)水平升高及阳性为实验室诊断依据。β2糖蛋白Ⅰ(beta2-glycoprotein1,β2-GPⅠ)也称为载脂蛋白H,其在血清中作为载脂蛋白存在,也是抗磷脂抗体的主要抗原,它在血清中能够与抗β2-GPⅠ抗体相互作用并结合形成二元复合物,此二元复合物在APS的发病发展的过程中发挥了极其关键的作用。本研究利用昆虫-杆状病毒表达系统对β2-GPⅠ进行表达,首先通过PCR鉴定重组病毒DNA,然后利用脂质体转染法将重组病毒DNA转染SF9细胞,获得P1毒液。提取重组病毒DNA,PCR鉴定阳性后,进行扩毒,待发出荧光细胞增加到一定程度时,收获细胞培养液得到P2,P3毒液。最后利用P3毒液在无血清培养基中培养的SF9细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE初步证明β2-GPⅠ基因在昆虫细胞SF9中得到表达,之后利用肝素亲和层析对细胞培养液进行蛋白纯化,经过SDS-PAGE及Western-blot鉴定,纯化效率为90%以上。本研究的目的在于深入了解β2-GPⅠ的生物结构及特性及其在体内生理作用,为今后研究其在APS发病过程中血栓形成奠定基础。
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