【摘 要】
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目的间皮瘤是一种恶性肿瘤,尽管发病率低,但目前呈上升趋势,且死亡率高,中位生存期仅为10-12个月。文献报道中推测我国将与其他国家一样面临间皮瘤发生的新的高峰期。由于间皮瘤长达30-40年的超长潜伏期,又缺乏特异性临床症状,尚无特异性检测指标,间皮瘤的研究滞后阻碍了间皮瘤的诊治水平提升。转运RNA（tRNA）具有组织特异性、相对稳定性,tRNA的表达水平与乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的发生发展等生物学行
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目的间皮瘤是一种恶性肿瘤,尽管发病率低,但目前呈上升趋势,且死亡率高,中位生存期仅为10-12个月。文献报道中推测我国将与其他国家一样面临间皮瘤发生的新的高峰期。由于间皮瘤长达30-40年的超长潜伏期,又缺乏特异性临床症状,尚无特异性检测指标,间皮瘤的研究滞后阻碍了间皮瘤的诊治水平提升。转运RNA（tRNA）具有组织特异性、相对稳定性,tRNA的表达水平与乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的发生发展等生物学行为具有相关性,而与间皮瘤的相关性研究尚未见报道。本课题利用高通量测序方法筛选出差异性的tRNA,研究间皮瘤临床病理诊断中的常用免疫表型与tRNA表达水平的关系,阐述tRNA的差异性表达水平是否可能影响了免疫表型相关蛋白的表达,为间皮瘤免疫表型的差异性提供tRNA层面的科学数据。方法1.所选样本为石蜡包埋间皮瘤组织,来自2003年-2019年期间经由辽宁省肿瘤医院病理科诊断为间皮瘤的石蜡标本60例。应用免疫组织化学染色方法检测CK5/6、WT1、CR、CK、CK7、MC、D2-40、Vim、S-100的表达情况,筛选出可以协助诊断的敏感性和特异性高的免疫表型指标。2.以60例间皮瘤为研究背景,选择6例免疫表型敏感性和特异性高低差异性显著的样本,分为敏感性和特异性高的实验组与敏感性和特异性低的对照组进行高通量tRNA测序,比较两组间的差异性显著的具有意义的tRNAs,并行PCR验证。3.生物信息学预测筛选的差异性tRNAs可能调控的靶基因,是否与间皮瘤免疫表型具有相关性和偏好性。结果1.60例间皮瘤,胸膜间皮瘤男性为主（54.1%）,腹膜间皮瘤女性为主（87.0%）;胸膜间皮瘤50岁以下少于腹膜间皮瘤（40.9%）,腹膜间皮瘤50岁以上多于胸膜间皮瘤（63.2%）;胸膜间皮瘤肿瘤直径＜2.0cm为主（55.6%）,腹膜间皮瘤肿瘤直径≥2.0cm为主（69.0%）。男性间皮瘤患者（30.6%）总生存率低于女性间皮瘤患者（46.4%）,胸膜间皮瘤患者（30.2%）总生存率低于腹膜间皮瘤患者（38.8%）。组织学分型、年龄、肿瘤直径与间皮瘤患者总生存率没有趋势性关系。60例间皮瘤石蜡组织进行免疫组织化学染色,结果显示CK5/6、WT1、CR在上皮样间皮瘤中的阳性表达率高于肉瘤样间皮瘤。2.根据免疫表型敏感性和特异性高低差异选出的6例间皮瘤包括上皮样间皮瘤4例、肉瘤样间皮瘤1例和双相型间皮瘤1例,通过tRNA高通量测序筛选出了9个差异性表达的tRNAs,经实时定量PCR验证发现tRNA-Asn-GTT-10-1和tRNA-Gln-TTG-2-1为差异性最为显著的tRNAs;生信预测调控的靶基因为SATL1、H1F0、PRB2、SMCP、RPL29、SEMG1、SEMG2、LYRM2和PRB1,可能与本组间皮瘤的免疫表型差异性表达具有相关性。结论1.男性、肿瘤直径＜2.0cm的间皮瘤患者发生在胸膜部位多于腹膜,女性、肿瘤直径≥2.0cm的间皮瘤患者发生在腹膜部位多于胸膜。男性间皮瘤患者总生存率低于女性间皮瘤患者,胸膜间皮瘤患者总生存率低于腹膜间皮瘤患者。CK5/6、WT1、CR的敏感性与特异性显著。2.CK5/6、WT1、CR表达差异性两组病例中,tRNA高通量测序发现9个差异性表达的tRNAs,生信预测与差异性表达的tRNAs关联的基因有218个。3.实时定量PCR验证发现tRNA-Asn-GTT-10-1和tRNA-Gln-TTG-2-1为差异性最为显著的tRNAs;预测调控的靶基因为SATL1、H1F0、PRB2、SMCP、RPL29、SEMG1、SEMG2、LYRM2和PRB1,可能与本组间皮瘤的免疫表型差异性表达具有相关性。
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