玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)是一种重要的昆虫病原真菌,目前主要用于防治烟粉虱、蚜虫、蓟马等农业害虫。虫生真菌制剂均由活体分生孢子制成,防治害虫时作用缓慢,防治效果不够稳定。这极大地制约了真菌类杀虫剂的产业化发展及推广应用。虫生真菌中的毒素能不受环境、温度、湿度等外界因子的影响,是虫生真菌的一个重要发展方向。虫生真菌毒素的提取、分离纯化和结构鉴定是摸清虫生真菌对昆虫的侵染致病机制和毒素产生作用机制的重要一环。烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)隶属半翅目(Hemiptera),包含了36个隐种,是世界重要农业作物害虫。烟粉虱的直接危害是由于其从韧皮部吸出植物的汁液,分泌蜜露,作为煤烟霉菌生长的基质。对烟粉虱的防治一直普遍使用广谱常规化学杀虫剂,导致了烟粉虱抗药性的发展,滥用化学物质导致了自然生物控制系统的间歇和烟粉虱的爆发。所有这些因素都需要研究和开发对环境安全、可生物降解和原生的害虫管理方法。因此,寻找自然发生的昆虫病原真菌及代谢物中的毒素,可能是克服环境污染和抗药性问题的一种潜在方法。本研究是根据玫烟色棒束孢发酵液、不同的溶剂提取方法的粗毒素中蛋白含量的产生,对15株玫烟色棒束孢进行筛选。此外,通过高效液相色谱-质谱(LC-MS)分析两株真菌分离物中的粗毒素,并观察这些毒素对烟粉虱的毒性。研究结果如下:(1)菌株筛选:测定了15株玫烟色棒束孢菌株经摇瓶发酵后的生物量(菌丝干物质质量)与发酵液蛋白浓度。摇瓶发酵后的生物量以菌株SP502、SP535、SP504最高,分别为1.167±0.049 g、0.891±0.039 g、0.799±0.120 g;菌株SP502、SP535和SP483的发酵液蛋白浓度最高,分别为0.372±0.001 mg/mL、0.346±0.005 mg/mL、0.293±0.004 mg/mL。(2)萃取毒素所需溶剂的筛选:利用三种有机溶剂分别对15株玫烟色棒束孢发酵液进行萃取,测定萃取后所得有机相及提取的粗毒素蛋白浓度。不同溶剂萃取后有机相的蛋白质浓度依次为:乙酸乙酯>甲醇>正己烷。不同溶剂萃取后得到的粗毒素蛋白含量依次为:乙酸乙酯>甲醇>正己烷。(3)不同有机溶剂萃取的粗毒素组分鉴定:分别对SP502和SP535发酵液、乙酸乙酯萃取粗毒素、甲醇萃取粗毒素、正己烷萃取粗毒素进行LC-MS鉴定,结果显示粗毒素中含有白僵菌素(Beauvericin)、青霉素G(Penicillin G)等用于农业、医药等领域的毒素。(4)生物测定:分别用菌株SP502和SP535的1.0×10~7孢子/mL浓度孢子悬浮液、摇瓶发酵抽滤后的发酵液、三种有机溶剂萃取发酵液后所得粗毒素对烟粉虱二龄若虫进行生物测定,均能引起试虫的死亡。比较两株玫烟色棒束孢不同处理对烟粉虱二龄若虫的致病力,结果显示:a.乙酸乙酯萃取粗毒素与甲醇萃取粗毒素的校正死亡率高,致死中时间短。b.菌株SP502致病效果均优于菌株SP535。