蛋白质是生命功能的执行体,蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体中蛋白质组成及其变化规律的科学。双向电泳作为蛋白质组研究的三大核心技术之一,是目前常用的唯一一种能够连续在一块胶上分离数千种蛋白质的方法,广泛应用于生物学研究的各个方面。随着桃果实表达序列标签的完善,桃果实发育的功能基因组学研究迎来了新的机遇。本实验以“久保”桃(Prunus persica L.cv.Okubao)中果皮为试材,通过比较不同上样量、不同上样缓冲液、不同胶条平衡缓冲液、不同pH范围固相pH梯度(immobilized pH gradients,IPG)胶条、不同染色方式等因素对双向电泳图谱效果的影响,试图建立一套适用于桃果实蛋白质组学分析的双向电泳方法。实验结果表明采用17cm的IPG胶条,90μg蛋白上样量,样品干粉溶于375μL含有尿素、硫脲、CHAPS、磺基三甲基胺乙内脂10、两性电解质等成分的水化上样缓冲液中,等电聚焦后用含有磷酸三丁酯的胶条平衡缓冲液一步平衡,进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色后的电泳图谱效果较好,但银染色得出的双向电泳图含有更多的蛋白质点,且背景清晰,适用于桃果实蛋白质组分析。继而采用pH 5.0~8.0的17 cm IPG胶条并应用以上方法对桃果实发育过程中硬核期的中果皮和内果皮进行蛋白质双向电泳分析,发现中果皮双向电泳图谱含有蛋白质点1318±125个,内果皮双向电泳图谱含有蛋白质点1415±133个,两张图谱相比较至少存在24.77%的差异,随后的蛋白质鉴定将利用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱来完成。