论文部分内容阅读
第一部分HepaCAM和PKCε蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达目的：检测HepaCAM和PKCε蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达。方法：免疫组化检测36例人肾透明细胞癌组织HepaCAM和PKCε蛋白在癌组织和癌旁组织的表达水平，于倒置显微镜下成像，IPP6.0软件分析平均光密度。结果：肾透明细胞癌组织HepaCAM表达显著缺失，而PKCε呈高表达状态；癌旁组织HepaCAM表达增高，而PKCε低表达。PKCε和HepaCAM表达成反相关。其中PKCε表达与肿瘤分级分期相关。差异有统计学意义（p<0.05）。结论：在组织水平验证了PKCε和HepaCAM蛋白的表达状况和分析了二者的关系。第二部分HepaCAM过表达影响PKCε胞浆和胞膜定位目的：探究感染Ad-GFP-HepaCAM腺病毒后对肾癌786-O细胞株PKCε蛋白表达和定位的影响。方法：感染Ad-GFP-HepaCAM腺病毒、Ad-GFP空载腺病毒后，western blot验证HepaCAM的表达，检测PKCε细胞膜、细胞浆蛋白和总蛋白的表达情况。细胞免疫荧光进一步验证HepaCAM表达对PKCε定位的影响。结果：实验组HepaCAM成功表达后，PKCε细胞膜蛋白降低、浆蛋白升高，总蛋白无显著差异。细胞免疫荧光实验定位实验组胞浆PKCε较空白和空载组增多（p<0.05）。结论：HepaCAM表达能影响PKCε在细胞膜和细胞浆中的定位变化，但不影响总蛋白表达。第三部分PKCε特异性转位抑制剂εV1-2对786-O细胞增殖和迁移的影响目的：验证εV1-2对786-O细胞株增殖和迁移力的影响；比较HepaCAM与εV1-2抑制克隆形成和细胞迁移的能力。方法：应用CCK-8实验摸索PKCε特异性转位抑制剂εV1-2对786-O细胞的最佳作用浓度和时间点。Western blot实验验证不同处理后MMP-9，cyclinD1和p-AKT蛋白表达。平板克隆和划痕实验验证HepaCAM与εV1-2对增殖和迁移力的影响。结果：10μmol/L和24h为εV1-2对786-O细胞的最佳作用浓度和时间点。Western blot证实HepaCAM表达和εV1-2处理后MMP-9，cyclinD1和p-AKT蛋白表达降低。平板克隆和划痕实验显示HepaCAM表达比εV1-2组更能有效抑制克隆形成和细胞迁移，且二者合用抑制效应更强（p<0.05）。结论：外源性HepaCAM表达和εV1-2处理都降低了增殖和迁移相关分子的表达，HepaCAM比εV1-2处理更有效抑制克隆细胞数和细胞迁移力。HepaCAM可能作为PKCε上游分子调节肾癌786-O细胞的增殖和迁移。