运用ISSR分子标记对腐食酪螨不同种群遗传多样性的研究

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本研究采用ISSR分子标记探讨了江西省内不同种群的腐食酪螨遗传多样性及其种群遗传结构。主要研究内容及结果如下。 (1)探索了提取腐食酪螨基因组DNA的最适条件:腐食酪螨个体数:100只:消化体系配方(250μL):SDS(10%)40μL、蛋白酶K(10mg/mL)10μL、STE 200μL;消化温度:45℃。 (2)腐食酪螨ISSR-PCR反应体系的优化。腐食酪螨ISSR-PCR的最佳反应体系:(25μL)Buffer 2.5 mM;Mg<2+>1.5 mM;dNTPs 0.2 mM;ISSR引物0.2μM;模板DNA 20 ng;Taq DNA聚合酶0.75U。 (3)实验从40条ISSR引物中筛选了12条扩增稳定、条带清晰、多态性高能引物,分析了采集于赣州饲料(GZ-S)、九江饲料(JJ-S)、南昌饲料(NC-S)、南昌食用菌(NC-J)中4个腐食酪螨种群的遗传多样性情况。一共获得121条清晰条带,其中84条具有多态性,多态带百分率(PPB)达69.42%。在种群水平上,平均期望杂合度(He),Shannon指数(Ⅰ)和多态带百分率分别为0.1576,0.2259,和36.57%;在物种水平上,平均期望杂合度(He),Shannon指数(Ⅰ)和多态带百分率(PPB)分别为0.2839,0.4118和69.42%。九江饲料(JJ-S)种群相对其他三个种群遗传多样性较高(H=0.2175;I=0.3127;PPB=51.24%)。 (4)遗传距离表和UPMGA系统发生树表明,各种群间的遗传距离(SD)在0.1005-0.1 810之间,平均遗传距离为0.1435±0.0277,各种群间的遗传相似系数(SD)在0.8344-0.9044之间,平均遗传相似系数0.8666±0.025 1,Neis遗传多样性分析表明种群间基因流水平较低(Gst=0.3496;Nm=0.9302);分析其结果可看出:江西地区腐食酪螨种群发生了一定的分化,南昌腐食酪螨两种群亲缘关系最为紧密;九江种群与其他种群亲缘关系较远,说明地域限制因素对于系统分化以及基因交流的影响强于寄主因素的影响。
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