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肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)是导致5岁以下儿童患手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,同时该病毒具有嗜神经组织的特性,致死率和致残率都很高。诺如病毒(Norovirus,NoV)是造成儿童和成人非细菌性急性胃肠炎流行的重要原因。这两种病毒都对人类的健康构成了不可忽视的威胁,研制有效的疫苗是防治它们最有效的途径之一。本研究的目的是获得含有EV71线性中和表位和诺如病毒P结构域的嵌合蛋白,并对其进行初步的免疫原性评价,主要包括了 3个部分的研究内容。第一部分,运用基因克隆的技术,将文献报道的3个EV71线性中和表位以单个或串联的形式分别克隆到含诺如病毒P结构域的原核表达质粒中,经测序验证重组质粒;第二部分,将构建正确的重组质粒转入到大肠杆菌表达系统中,通过IPTG诱导嵌合蛋白表达,并用亲和纯化的方式对嵌合蛋白进行纯化;第三部分,用纯化后的嵌合蛋白免疫小鼠,通过免疫印迹、ELISA以及中和试验对嵌合蛋白的免疫原性进行初步的评价。通过以上3个部分的研究,我们取得了如下结果:1)成功构建了含EV71的3个单表位、4个串联表位与诺如病毒P结构域嵌合的重组质粒;2)这些重组质粒在大肠杆菌中所表达的7个嵌合蛋白都以部分可溶的形式存在;3)通过亲和纯化获得的P结构域和Pm+SP55-70-28嵌合蛋白都能够自发形成直径约20nm的颗粒,用这两种蛋白免疫小鼠后获得的血清抗体滴度分别是1:32,000、1:1,024,000;4)免疫印迹分析表明,(ⅰ)7个嵌合蛋白都能与抗诺如病毒P结构域的抗血清发生反应;(ⅱ)除了含单表位SP55和SP28的嵌合蛋白外,其它嵌合蛋白均能与抗EV71的抗血清反应;(ⅲ)除了 P结构域蛋白、含单表位SP55和SP70以及含串联表位SP55-70的嵌合蛋白外,其它嵌合蛋白都能与抗Pm+SP55-70-28的抗血清发生反应;5)中和试验结果表明,抗Pm+SP55-70-28小鼠血清的中和抗体效价约为 1:4。综上所述,本研究获得了 7个含EV71线性中和表位和诺如病毒P结构域的嵌合蛋白,这些蛋白中部分具有针对EV71和诺如病毒的双重抗原性;用嵌合蛋白Pm+SP55-70-28免疫后的小鼠血清对EV71具有一定的中和作用。因此,本研究为诺如病毒和EV71二价疫苗的研发奠定了基础,同时也为基因工程疫苗的研制提供了新思路。