雌激素是人体内重要的激素之一，具有广泛的生理功能。雌激素缺乏与许多疾病相关，如卵巢功能低下，更年期综合征以及骨质疏松等；雌激素过剩也将导致某些疾病，如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等。目前，如何降低肿瘤组织中的雌激素水平而达到治疗肿瘤的目的，已经得到广泛的研究，但促雌激素生成或调节卵巢功能药物或其相关研究则很少。　　 本实验室前期的研究发现，瓦山安息香属植物果实中的乙醇提取物具有促雌激素生成作用，通过活性追踪和结构鉴定，确认促E2生成的主要成分为苯并呋喃类化合物。苯并呋喃类化合物的作用与芳香酶有关，但其确切的作用机理有待证实和深入研究。　　 为了探讨安息香苯并呋喃类化合物的促雌激素合成的作用机理，拟采用如下的实验方案：　　 1、细胞学方面，对小鼠3T3-L1前脂肪细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及人卵巢癌细胞OVCAR-3、OVCAR-4、OVCAR-5、OVCAR-8、IGROV1等细胞株，采用RT-PCR和ELISA方法研究芳香酶Aro基因的表达和雌二醇E2的生成，芳香酶抑制剂Formestane作为阳性对照，研究时效曲线和量效曲线，确定安息香苯并呋喃类化合物SP25的有效浓度和作用时间。　　 2、 RNAi方面，设计合成了针对人芳香酶Aro基因的3对RNAi序列，转染入细胞，芳香酶促进剂Forskolin和地塞米松、芳香酶抑制剂Formestane作为阳性对照，采用实时定量PCR技术，研究RNA干扰后，安息香苯并呋喃类化合物SP25对人芳香酶Aro基因表达水平的影响。　　 3、雌激素受体方面，设计一段ERE的雌激素调控元件，构建重组荧光素酶报告基因载体，瞬时转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，建立针对雌激素受体的报告基因筛选模型，观察安息香苯并呋喃类化合物SP25对雌激素受体的选择性和亲和力，从受体水平考察安息香苯并呋喃类化合物SP25促进雌激素生成的药理学机理。　　 实验结果显示：　　 1、分化后的小鼠3T3-L1前脂肪细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及人卵巢癌细胞OVCAR-3、OVCAR-4、OVCAR-8等细胞株具有芳香酶基因的表达。睾酮向雌二醇的转化能够被芳香酶抑制剂Formestane所阻断，其中OVCAR-3最适合进行下一步的RNAi研究。　　 2、 RNAi实验结果显示，设计的3对RNAi序列中R2的干扰效果最强，相应的阴性对照C2与R2的表达量相差118倍(24小时)和19倍(48小时)，显示R2/C2这组序列可用于进一步的RNAi试验。以R2干扰OVCAR-3细胞株，药物作用24、48小时后，芳香酶抑制剂Formestane与R2相对表达量相比分别为0.83倍和0.04倍；芳香酶促进剂Forskolin与R2相对表达量相比分别为3.61和1.84倍；芳香酶促进剂地塞米松与R2相对表达量相比分别为5.76倍和3.49倍：苯并呋喃类化合物SP25与R2相对表达量相比分别为8.13倍和4.59倍。实验证实安息香苯并呋喃类化合物SP25能够促进因RNAi而发生基因沉默的人芳香酶Aro表达水平的上调。　　 3、雌激素受体实验结果显示，构建成功重组pERE-pGL3-promoter荧光素酶报告基因载体和基于报告基因系统的雌激素受体激动剂或拮抗剂的细胞筛选模型。实验结果表明安息香苯并呋喃类化合物SP25与雌激素受体ERα和ERβ亲和力选择性之比约为3:1，SP25通过与雌激素受体ERα结合作用其受体，刺激芳香酶的表达。　　 本课题通过RNA干扰、ELISA、荧光实时定量PCR、报告基因筛选模型等技术手段，从细胞水平、蛋白酶水平和基因表达水平、雌激素受体水平等方面系统地研究了从瓦山安息香属植物果实中提取的苯并呋喃SP25促进促雌激素生成的机理研究。试验结果显示苯并呋喃类化合物SP25促雌激素生成的主要作用机制是直接促进芳香酶基因表达水平，以及与雌激素受体a结合，刺激芳香酶活性。