大负荷运动诱导骨骼肌细胞自噬的Omi途径及针刺干预效应

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目的:观察一次大负荷运动对大鼠骨骼肌细胞自噬体结构和功能的影响,分析自噬蛋白及相关蛋白的变化;以Omi/Htr A2为切入点,探讨大负荷运动诱导骨骼肌自噬的分子机制;观察针刺对大负荷运动后骨骼肌自噬的影响,并阐明其作用机理。方法:研究一将大鼠分为对照组(C)和运动组(E);研究二将大鼠分为单纯对照组(C)、安慰剂组(D)、抑制剂组(U)、运动组(E)和抑制剂运动组(EU);研究三将大鼠分为单纯对照组(C)、针刺组(A)、运动组(E)和运动针刺组(EA)。E为一次大负荷下坡跑干预,U为抑制剂ucf-101干预,A为针刺干预。各组取干预后0h、12h、24h、48h和72h时间点,分别用透射电镜观察比目鱼肌细胞内自噬体超微结构变化;应用Western Blot方法检测比目鱼肌Omi/Htr A2、Hax-1、Beclin1和LC3的蛋白表达;利用免疫荧光技术观测LC3位及量;用免疫共沉淀技术测定Hax-1和Beclin1蛋白结合水平。结果:(1)一次大负荷运动后比目鱼肌细胞自噬体数量增加,LC3自噬荧光增强,自噬蛋白Beclin1和LC3表达出现一过性升高;(2)一次大负荷运动后比目鱼肌细胞内Omi/Htr A2蛋白表达升高、Hax-1和Beclin1蛋白结合减弱。ucf-101干预后Omi/Htr A2蛋白表达降低、Hax-1和Beclin1蛋白结合增强;(3)抑制剂运动干预和运动后针刺,均能抑制大负荷运动诱导比目鱼肌细胞内自噬体的增多,下调自噬蛋白Beclin1和LC3的表达量,降低LC3的荧光强度。结论:(1)一次大负荷离心运动可以诱导骨骼肌细胞自噬增强,这种增强可通过Omi/Htr A2-Hax-1-Beclin1途径参与;(2)ucf-101可以通过抑制Omi/Htr A2对Hax-1的切割作用,增强后者对Beclin1的结合性抑制,最终降低自噬水平;(3)针刺可以通过Omi/Htr A2-Hax-1-Beclin1途径调节一次大负荷离心运动诱导的自噬。
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