国内外研究结果显示，各类型白血病细胞均较高表达血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)。VEGF为已知最强，特异性最高的血管生成调节因子，除在恶性肿瘤血管生成过程中发挥重要作用外，可直接刺激髓系白血病细胞增殖，诱导白血病细胞抵抗化疗药物引起的细胞凋亡。VEGF通过二聚体形式与受体结合，从而发挥相关生物学功能，因而针对VEGF及其受体为靶点实施干预，可能为白血病治疗提供新惊喜，为后期临床运用相关抗血管生成策略治疗白血病提供实验依据。　　 第一部分白血病细胞株中VEGF及其受体表达水平检测目的：检测多种白血病细胞株中VEGF及其受体的表达水平，探讨相关基因在白血病细胞生物学行为中的意义。　　 方法：体外培养多种白血病细胞株(NB4、U937、K562、Jurkat)，应用RT-PCR、Real-time PCR、Western blot等技术检测白血病细胞株及正常对照细胞中VEGF及受体表达的水平。　　 结果：检测显示4株白血病细胞(NB4、U937、K562、Jurkat)均高表达VEGF，中等量表达VEGFR1，而低表达VEGFR2。各细胞相对正常对照组，VEGF，VEGFR1，VEGFR2的相对表达倍数分别为3.97，36.00，19.16，8.46；2.28，17.51，4.86，3.92；1.35,4.03,2.07，1.13。Western blot结果显示4株白血病细胞均表达VEGF及其受体，而正常对照组仅少量表达VEGF。　　 结论：白血病细胞不同程度表达VEGF及其受体，各细胞中VEGF受体以VEGFR1呈中度表达，VEGFR2低表达，提示VEGF主要通过作用于细胞膜上的VEGFR1受体而发挥生物学作用。　　 第二部分应用ShRNA构建VEGFR1基因沉默白血病细胞株　　 目的：应用慢病毒载体ShRNA靶向沉默高表达受体VEGFR1，探讨应用分子生物学技术对细胞进行干预，构建敲除VEGFR1表达的白血病细胞株。　　 方法：构建慢病毒ShRNA干扰载体，转染入目的细胞，靶向沉默VEGFR1基因表达，应用RT-PCR、Real-time PCR、Western blot等检测目的基因敲除效果。　　 结果：构建入慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定，与设计序列相同；转入U937细胞中，特异性沉默VEGFR1基因表达，通过Real-timePCR检测示抑制率达71.7％，Western blot可见VEGFR1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。　　 结论：靶向VEGFR1慢病毒ShRNA载体，可特异性沉默VEGFR1基因表达，成功构建并筛选出KD-VEGFR1-U937稳定细胞株。　　 第三部分药物诱导白血病细胞细胞增殖及凋亡的实验研究　　 目的：本实验探讨以VEGF及VEGFR1为靶点联合应用单克隆抗体(Bevacizumab)和常规化疗药物对多种白血病细胞株生物学行为的影响，研究体外应用ShRNA，单克隆抗体和药物对白血病细胞株增殖、凋亡的影响。　　 方法：体外培养白血病细胞株、KD-VEGFR1白血病细胞株：应用CCK-8法检测经Bevacizumab及不同浓度药物作用于体外培养细胞后细胞增殖、抑制率：流式细胞仪(FCM)检测VEGF、Bevacizumab、化疗药物联合作用后细胞凋亡率的变化。　　 结果：KD-VEGFR1-U937细胞生长速度较正常U937细胞减慢；VEGF可刺激正常U937细胞增殖，呈明显的量效关系，而对KD-VEGFR1 U937细胞作用不明显，与NC组比较差别有统计学意义(P＜0.05)；流式检测显示正常U937细胞经VEGF作用后，凋亡率较对照组细胞减少(P＜0.05)，而Bevacizumab作用组细胞凋亡率较对照组有所增加，但差异无统计学意义(P＞0.05)；联合VEGF、Ara-C组作用48h后，细胞凋亡率较Ara-C组明显减低(P＜0.01)，联合应用Bevacizumab和Ara-C48h后，细胞凋亡率较单用Ara-C组凋亡率增加(P＜0.05)，联合应用VEGF、Bevacizumab和Ara-C组细胞凋亡率与Ara-C组无明显差异(P＞0.05)，而在KD-VEGFR1 U937细胞中，各组作用后与Ara-C组均无明显差异(P＞0.05)。　　 结论：VEGF可明显刺激部分白血病细胞增长，抵抗化疗药物诱导的凋亡作用；Bevacizumab可通过中和VEGF在一定程度上抑制细胞的增殖，提高白血病细胞对化疗药物的敏感性；ShRNA沉默VEGFR1表达，可阻断VEGF的作用，抑制细胞生长，增强白血病细胞对化疗药物敏感性。