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天然的细胞分裂素是七大植物激素的一种,在植物的生长和发育过程中起重要作用。它能够促进细胞分裂和分化,促进根的形成和生长,消除顶端优势,延缓叶片衰老等,几乎影响着植物体从胚胎形成到衰老的整个生长发育过程。精确测定植物组织中细胞分裂素的含量,对进一步了解细胞分裂素在植物体内的生物学作用意义重大。由于植物基质复杂,细胞分裂素含量少,植物体内各种酶的存在会导致细胞分裂素在几种形式之间不断转化、代谢和降解,对细胞分裂素的定性和定量分析困难重重。因此,寻找选择性好,灵敏度高的分析方法非常迫切。尽管近年来针对细胞分裂素的分析方法均有报道,但寻找更加简便、快速、实用的新方法依然是细胞分裂素分析的研究热点之一。本论文致力于开发新型的样品预处理方法和分离方法用于细胞分裂素的定量分析。主要内容如下:1.评述了细胞分裂素的研究概况,着重介绍了植物样品中细胞分裂素的样品制备、分离、检测技术以及目前分析科学领域新型的样品前处理方法和分离技术。2.采用P(AMPS-co-EGDMA)聚合物整体柱作为聚合物整体柱微萃取(PMME)的萃取介质对复杂植物样品中的细胞分裂素进行富集与纯化;并以硅胶柱为分离柱,首次建立了细胞分裂素的亲水作用色谱(HILIC)分离方法。PMME材料制备简单,操作简便,节省溶剂,萃取效率高;HILIC无需梯度洗脱,在等度洗脱下即可有效分离多种细胞分裂素及干扰物, HILIC模式下高有机溶剂含量的流动相很大程度上提高了与质谱联用的灵敏度;而以电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)为检测系统,更进一步提高了定性能力和分析灵敏度。我们将这种PMME-HILIC-MS/MS方法成功用于水稻、拟南芥、油菜中细胞分裂素的测定,为复杂植物样品中细胞分裂素的定量分析提供了一种可靠、实用的方法。3.采用C18和混合模式(silica@C8/SO3H)SPE的串联组合,成功建立了一种简单、快速的一步固相萃取法用于定量分析植物组织中的内源性细胞分裂素。植物提取液在过C18小柱除掉部分色素和酯类物质后,不经过浓缩和重新定容,即可直接在混合模式SPE柱上上样,并得到较高的回收率(绝对回收率>80%)。此方法避免了冗长的溶剂浓缩和多次活化步骤,可极大缩短前处理时间,实现快速、高效、高通量的萃取。4.在第三部分内容的基础上,建立了以P(MAA-co-EGDMA)聚合物整体柱为在线富集柱的的串联固相萃取-在线富集-亲水作用色谱串联质谱联用方法(tandem SPE-online trapping-HILIC-MS/MS)定量分析植物中的内源性细胞分裂素。基于自动进样器与双六通阀双泵的全自动在线富集系统,能够进一步除杂,并实现大体积上样,避免了因进样量受限而造成的样品损失,提高了检测灵敏度。串联固相萃取与在线富集系统的结合,在简化前处理步骤,加快前处理的速度的同时,将检测灵敏度提高了一个数量级以上。我们考察了此方法所需的最低植物用量,结果表明,仅需20mg甚至更少的植物样品即可对多种细胞分裂素准确定量。此方法的建立对研究植物激素代谢机制和生理机能等有较好的应用价值。5.制备了新型的Fe3O4/SiO2/poly(AMPS-co-EGDMA)磁性聚合物并将其作为磁固相萃取介质(MSPE)用于细胞分裂素的富集。实验证明,合成的磁性聚合物具有大比表面和多孔结构,对细胞分裂素有较好的富集能力。MSPE的分散萃取模式可直接用于大体积液体样品中痕量细胞分裂素的分析,其磁分离能力使细胞分裂素的富集操作简便快速。MSPE与HILIC-MS/MS联用简单快速,可作为分析植物基质中细胞分裂素的常用方法。