CNS再生能力明显低于周围神经系统（PNS）,是由于神经元成熟过程中,轴突延伸能力逐渐萎缩,如何唤醒神经元再生能力,恢复神经功能是急需解决的难题。文献表明,神经损伤后,神经元内Src的磷酸化受到抑制,从而影响突起的形成和生长,激活的Src还通过F-actin骨架调节高尔基体的结构与亚细胞定位,避免高尔基体的裂解,但其作用机制不清。激活的Src家族相关蛋白YAP,可促进ANLN的表达,稳定F-actin。ANLN又可通过Septin保持高尔基体结构完整。敲除ANLN,突起形成、导向和分支都受到干扰,说明ANLN调控了神经元增殖和突起形成。我们前期工作表明,脊髓损伤30min后,神经元高尔基体分散、碎片化。那么,Src是否与ANLN共同调解F-actin保护受损神经元呢?我们推测Src可能通过ANLN稳定高尔基体结构,促进损伤神经元突起形成及生长。本研究应用H₂O₂建立原代皮层神经元氧化损伤模型。应用Src激活剂激活Src。设计ANLN-RNAi,干扰神经元ANLN-1的表达。应用形态学与分子生物学技术阐明Src是否通过ANLN-1稳定高尔基体结构,促进损伤神经元突起形成。方法:原代培养SD大鼠乳鼠皮层神经元,应用MTT法确定过氧化氢浓度,构建神经元氧化应激损伤模型。采用RNAi技术转染皮层神经元,应用RT-PCR技术检测ANLN m RNA表达的变化;在ANLN沉默后加入Src激活剂（SA）,免疫组织细胞化学染色观察p Src和高尔基体的分布。应用Western blot技术检测p Src、ANLN蛋白水平的变化;利用Phalloidin（鬼笔环肽）标记肌动蛋白（F-actin）,观察ANLN干扰后损伤神经元突起的变化。结果:1.神经元氧化应激损伤模型的构建100μm H₂O₂处理24h后的神经元活性明显低于对照组。神经元损伤24h后,鬼笔环肽标记F-actin结果表明,初级突起数和分支复杂程度都明显低于对照组。2.Src激活对H₂O₂损伤神经元ANLN-1、p Src和高尔基体的作用GM130的免疫荧光染色显示H₂O₂组高尔基体分散,长度明显高于对照组。H₂O₂+SA组初级突起数和分支复杂程度明显增加。Western blot结果显示,H₂O₂组p Src和ANLN表达明显低于对照组,H₂O₂+SA组p Src和ANLN表达明显多于H₂O₂组。3.Src通过ANLN-1稳定高尔基体调节损伤神经元突起形成氧化应激状态下,激活Src,沉默ANLN,发现H₂O₂+ANIi干扰组和H₂O₂+ANIi+SA组细胞核中ANLN表达明显降低。免疫细胞化学染色显示,H₂O₂组突起末端中p Src表达明显低于对照组,H₂O₂+SA组突起末端中p Src表达明显高于H₂O₂组;H₂O₂+SA+ANIi组突起末端中p Src表达与H₂O₂+SA组相比没有明显差异,但明显高于H₂O₂组和H₂O₂+ANIi组,提示干扰ANLN不影响Src激活剂对Src的激活。氧化应激状态下,激活Src,沉默ANLN,GM130的免疫荧光染色观察了高尔基体的结构及分布,可见对照组GM130分布于核周,H₂O₂组GM130分散,分布于胞体和突起,H₂O₂+SA组GM130分布于核周,H₂O₂+ANIi组和H₂O₂+SA+ANIi组GM130弥漫分布于细胞质中,失去了高尔基体的线性结构。对高尔基体的长度统计表明,H₂O₂组细胞的高尔基体长度明显高于对照组;H₂O₂+SA组细胞高尔基体长度明显低于H₂O₂组,提示激活Src可以抑制氧化应激损伤造成的高尔基体分散,H₂O₂+SA+ANIi组与H₂O₂组细胞高尔基体长度没有明显差异,但大于H₂O₂+SA组,且差异具有统计学意义,说明ANLN的干扰阻碍了Src对高尔基体的稳定作用。氧化应激状态下,激活Src,沉默ANLN,观察损伤神经元初级突起数和分支复杂程度,结果发现H₂O₂+SA（Src激活剂）组初级突起数和分支的复杂程度均明显多于H₂O₂组,H₂O₂+ANIi组和H₂O₂+SA+ANIi组初级突起数和分支的复杂程度均明显低于H₂O₂+SA组,提示Src激活明显促进损伤神经元突起分支的形成,ANLN的干扰阻碍了Src对损伤神经元突起形成的作用。结论:氧化应激状态下Src通过促进ANLN-1的表达调解F-actin组装,稳定高尔基体结构,进而促进损伤神经元突起的形成。