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森林革蜱(Dermacentor silvarum)是一种重要的体外寄生虫，广泛分布于中国北方、俄罗斯和蒙古国等地，种群数量大且传播森林脑炎和马巴贝虫等疾病，并能经卵传递森林脑炎病毒。4D8最早是在肩突硬蜱(Ixodes scapularis)中发现的，是一个蜱保护性抗原，之后从6个属的10种硬蜱中克隆得到，它们的核酸和氨基酸序列在这些蜱种中保守，分别有65–98和60–98%的一致性。4D8基因通过RNAi技术沉默后，通过重组蜱4D8的免疫实验证明它能通过降低蜱类的存活率和繁殖率来保护宿主免受蜱的侵扰。这些研究结果又在微小扇头蜱(Boophilus microplus)、美洲花蜱(Amblyomma americanum)、血红扇头蜱(Rhinpicephalus sanguineus)、变异革蜱(Dermacentor variabilis)等多个物种中得以证实。因此，4D8是一种理想的疫苗候选抗原，可用于防治多种蜱类并能作用于该基因的同源直系基因产物。本研究以森林革蜱为研究对象。首先通过液氮研磨法提取森林革蜱饥饿雌性成蜱总RNA，将其反转录成cDNA，根据GenBank中的蜱4D8基因序列设计两对引物，一对引物用于扩增获得4D8基因，另一对引物带有酶切位点，用于之后的蛋白表达体系的构建。将目的基因连入pMD19-T载体，构建重组克隆载体pMD19-T-4D8。经测序分析，表明森林革蜱4D8与边缘革蜱(Dermacentor marginatus)同源性高达100%，与变异革蜱同源性高达98%。之后构建重组克隆载体pMD19-T-4D8e，并对pMD19-T-4D8e质粒及表达载体pET-32(a+)质粒分别进行双酶切，双酶切片段经T4连接酶连接后，将质粒转化至克隆载体DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆，提质粒，转化至原核表达载体E.coli rosetta感受态细胞中，构建得到重组原核表达载体pET-32(a+)-4D8。经IPTG诱导，表达并纯化重组蛋白，通过免疫印迹表明，该重组蛋白是分子质量为40KD左右的融合蛋白，且表达产物能被森林革蜱雌性成蜱抗原免疫兔血清识别。此研究结果为制备抗蜱疫苗提供依据，对了解蜱类生理学具有重要的理论意义，对蜱类防治具有实际应用价值。