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目的:本实验通过构建大鼠视网膜缺血再灌注模型,使用3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)进行玻璃体腔注射的方法,探讨其在大鼠视网膜缺血再灌注后的作用并进并探讨其可能的作用机制,从而为视网膜疾病的早期预防和治疗提供新的思路和依据。方法:1.构建大鼠视网膜缺血再灌注模型通过生理盐水前房灌注法构建视网膜缺血再灌注大鼠模型,将30只SD大鼠随机分为空白对照组(NC组)、假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IRI组)。采用苏木精伊红(HE)染色观察大鼠视网膜神经节细胞数量变化;Western-blot检测各组自噬相关蛋白LC3、Beclin1在各组大鼠视网膜中的蛋白表达水平。2.探讨3-MA对大鼠视网膜缺血再灌注的作用与机制将40只SD大鼠随机分为4组,每组10只。分别为正常对照组(NC组)、假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IRI组)、视网膜缺血再灌注+3-MA给药组(IRI+3-MA组)。视网膜缺血再灌注+3-MA给药组(IRI+3-MA组)在按照第一部分方法构建模型成功后立即行3-MA(10mmol/L)的玻璃体腔注射。用苏木精伊红(HE)染色观察视网膜神经节细胞数量变化;免疫组织化学染色法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1以及凋亡蛋白Caspase-3在各组大鼠视网膜中的AOD值,Western-blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1、抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Caspase-3在各组大鼠视网膜中的蛋白表达水平。结果:1.构建视网膜缺血再灌注的大鼠模型(1)HE染色结果显示:Sham组与NC组相比,两组视网膜神经节RGC细胞数量相比较无统计学差异(P>0.05),IRI组中视网膜神经节(Retina ganglion cells,RGC)细胞数较NC组数量明显减少(P<0.01);(2)Western blot结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1的表达无统计学差异(P>0.05),IRI组相比于NC组LC3、Beclin1的表达量明显增加(P<0.05)2.探讨3-MA对大鼠视网膜缺血再灌注的作用与机制(1)HE结果染色:Sham组与NC组相比,两组RGC细胞数量相比较无统计学意义(P>0.05),IRI组与3-MA+IRI组中RGC细胞数较NC组数量明显减少(P<0.01);但3-MA+IRI组中RGC细胞数相较于IRI组有所增加(P<0.01)。(2)免疫组化学结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3蛋白表达无明显差异(P>0.05),IRI组和IRI+3-MA组与NC组相比,LC3、Bec lin1及Caspase-3的AOD值有明显增加(P<0.01),而IRI+3-MA组与IRI组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3的AOD值显著下降(P<0.01),(3)Western blot结果显示:Sham组与NC组相比,LC3、Beclin1、Bcl-2以及Caspase-3蛋白表达无明显差异(P>0.05),IRI组和IRI+3-MA组与NC组相比,LC3、Beclin1、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表达量有明显增加(P<0.05),而IRI+3-MA组与IRI组相比,LC3、Beclin1、Caspase-3蛋白表达量有所下降(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达量有所增加(P<0.05)。结论:1.大鼠视网膜缺血再灌注可以使视网膜神经节细胞凋亡2.大鼠视网膜缺血再灌注可以激活视网膜中的自噬相关通路并使视网膜中的自噬相关蛋白表达升高。3.3-MA可以降低视网膜缺血再灌注所引起的自噬相关蛋白的表达增高,对视网膜神经节细胞具有保护和抗凋亡的作用。