紫藤叶斑病的病原鉴定及生物学特性研究

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紫藤[Wisteria sinensis(Sims)Sweet.]为豆科紫藤属落叶木质大藤本,是著名的园林环保观赏花卉。紫藤集观赏、医疗、环保价值于一身,具有极高的潜在研究价值。随着紫藤种植面积的增长,自然生境下紫藤真菌性病害多有发生。尤以紫藤叶斑病发生较为普遍,严重影响紫藤的美观,发病严重时可至全株叶片枯死,对紫藤可造成毁灭性危害。但是目前国内外对紫藤叶斑病的研究鲜有报道。为了有效防控该病害的扩展和蔓延,保证观赏植物及园林产业的可持续发展,迫切需要对紫藤叶斑病进行全面的调查和鉴定。本研究在安徽省霍邱县和池州市采集有典型叶斑病的病叶,进行病原菌的分离纯化和致病性测定,对病原菌进行形态学以及分子生物学鉴定,进而研究病原物的生物学特性和药剂毒力,以期待为病害的防治奠定理论基础。主要研究结果如下:1、病原菌的分离与致病性测定于2014年8月在安徽省霍邱县和池州市采集有典型叶斑病的病叶,按常规的组织分离法进行分离。得到2株相同的病菌,将两株菌分别编号为ZT-1和ZT-2,选取菌株ZT-1进行致病性测定,结果表明无论是菌丝块接种还是孢子悬浮液接种叶片(对叶片造成伤口前提下),均可以产生典型症状,并可以再分离得到与之相同的菌株,由此可知ZT-1菌株为该病害的病原菌。2、病原菌的鉴定以对病原菌产孢表型与孢子及菌落形态的观察为基础,对ZT-1菌株的3个基因位点序列ITS与gpd和TEF进行分析,经PCR扩增并测序并在Genbank中Blast后,利用DNAMAN软件构建系统发育树。结果显示与ZT-1同源性最高的种中有且仅有Alternaria alternata在三个系统发育树中同时出现。根据形态学的观察结果:在PCA滤纸上,25℃,12h光照和12h黑暗交替条件下,培养5d,产孢表型呈矮树状,在分生孢子的侧面和基部产生1-5个孢子的孢子链;分生孢子倒棒状、倒梨形、卵形、广椭圆形,孢身22-51×8-13?m,具有1-5个横膈膜和0-3个纵、斜隔膜。与Alternaria alternata小孢子种形态一致。由此可知引起该病害的病原菌为链格孢菌Alternaria al ternata(Fr.:Fr.)Keissler,将该病害定名为紫藤叶斑病。3、病原菌的生物学特性病原菌ZT-1菌丝在10-35℃温度范围内均能生长,最适生长温度为28℃,致死温度为55℃,10min。菌丝在pH4-10的条件下均可生长,菌丝生长的最适pH为6。光照利用病原菌菌丝生长,在无碳或氮源条件下均可以生长,但是在以葡萄糖和淀粉为碳源,以蛋白栋和牛肉膏为氮源时生长最好。其中氨态盐对菌丝生长有抑制作用。分生孢子在10-35℃温度范围内均能够萌发。在5-29℃随着温度的升高,孢子萌发率逐渐增加,最适萌发温度为29℃,致死温度为55℃,10min。在pH3-10范围内均可以萌发,最适pH为6.2。光照对孢子萌发影响差异不显著,最适碳源为蔗糖、麦芽糖、果糖和葡萄糖。4、杀菌剂对病原菌的毒力作用供试的10种杀菌剂对病原菌菌落的生长都有一定的抑制作用,吡唑醚菌酯的EC50最小,为0.0777?g/mL,对菌丝的抑制作用最强。对该病原菌的抑制效果最差的是嘧菌酯和多菌灵,其两者的EC50值均高于1000?g/mL。供试的10种杀菌剂对病原菌的分生孢子萌发都有一定的抑制作用。苯醚甲环唑作用效果最强,EC50为0.3513?g/mL,多菌灵抑制效果最差,其EC50为16270.5916?g/mL。
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