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目的: 根据组织工程学原理,以DPSCs为种子细胞,制备USPIO标记的HA/SF复合支架,探讨USPIO/HA/SF/DPSCs复合体系牙髓再生的可行性;并通过活体MR成像,组织学、免疫组化、Wester blot蛋白印迹法等方法检测,初步探讨支架降解和牙髓干细胞增殖,分化的影像学和组织学变化特征。 方法: 1.DPSCs的分离与鉴定采取酶消化法,从健康成人拔除第三磨牙的牙髓中提取牙髓干细胞培养、增殖、传代;通过流式细胞仪进行细胞周期测定和细胞表型鉴定;通过成骨和成脂诱导实验,对其多向分化能力进行鉴定。 2.HA/SF的合成、表征及生物相容性实验通过合成不同浓度HA的HA/SF复合支架,并对其物理特性进行表征,以及复合支架对DPSCs增殖、分化的影响和血液相容性的实验,对其作为牙髓组织工程支架的可行性进行初步探讨。 3.USPIO/HA/SF合成、表征、影像学特征和细胞学的体外评价实验合成含不同浓度USPIO的USPIO/HA/SF复合支架,通过对其物理学特性、影像学特征检测以及其对DPSCs的增殖、分化的影响的评价,探讨USPIO标记牙髓组织工程支架进行影像学检测的最佳浓度和复合支架对DPSCs增殖和分化的影响。 4.USPIO/HA/SF/DPSCs复合体系牙髓再生的体内评价实验使用经典的牙髓再生的动物实验模型,将实验材料HA/SF、USPIO/HA/SF、HA/SF/DPSCs及USPIO/HA/SF/DPSCs置入牙片段并埋植于裸鼠皮下,通过活体MR检测,组织学检查,探讨USPIO/HA/SF/DPSCs复合体牙髓再生过程中影像变化特征、组织学变化特点。 结果: 1.获取的DPSCs增殖能力强,具有多向分化潜能。 2.实验表明:(5mg)HA/SF物理特性稳定,更有利于DPSCs的增殖与分化,而且具有良好的血液相容性。 3.实验表明:含0.25mgUSPIO的HA/SF支架物理特性稳定,磁共振成像清晰、准确,细胞毒性低,对DPSCs的增殖和分化无明显不良影响。 4.实验表明:在植入2W时,含USPIO对组织工程支架可以使R2值升高,随着时间的延长影响逐渐减小;USPIO/HA/SF/DPSCs复合体可以较好的分化出具有牙源性特征的蛋白,以及牙髓组织中具有的血管、成纤维细胞以及矿化物。 结论: HA/SF复合组织工程支架可以为DPSCs的粘附、增殖、分化提供较为理想的支持,有望成为牙髓组织工程较为理想支架材料之一;USPIO可以作为MR成像中组织工程支架的标记物;MR可用于检测组织工程牙髓再生过程的组织变化影像学特点。