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目的:本研究采用walker256乳腺癌腹水瘤细胞制备大鼠胫骨骨癌痛模型,并验证模型是否制备成功。在此基础上研究乳腺术后骨转方对此模型的干预作用,以及中药对骨癌痛的外周机制及脊髓机制的调控作用。 方法:将浓度为2×107/ml的walker256细胞悬液注入大鼠胫骨骨髓腔制备骨癌痛模型。Shame组注入等体积的不含肿瘤细胞的大鼠腹水,通过观察大鼠体重、热缩足反射潜伏期、影像学和组织形态学,证实建模成功。在此基础上,将大鼠随机分为6组,每组9只,于造模后3天起给予中药干涉。乳腺术后骨转方高剂量组:乳腺术后骨转方水煎剂51g/kg,1次/日×4周,灌胃;乳腺术后骨转方中剂量组:乳腺术后骨转方水煎剂25.5g/kg,1次/日×4周,灌胃;乳腺术后骨转方低剂量组:乳腺术后骨转方水煎剂12.75g/kg,1次/日×4周,灌胃;唑来膦酸组:3ug/100g,皮下注射给药,于造模后第5、7、12、14、16、19天注射,每日一次。唑来膦酸+骨转方高剂量组:乳腺术后骨转方水煎剂51g/kg,1次/日×4周,灌胃;同时,于造模后第5、7、12、14、16、19天皮下注射唑来膦酸,3ug/100g,每日一次。模型组:于造模后3天起,2ml生理盐水灌胃,1次/日×4周。每周测量各组大鼠体重、热缩足潜伏期PWTL,造模四周后行影像学检查,处死大鼠,取左下肢胫骨及腰部脊髓标本,应用HE染色、IHC、western-Blot、Elisa、RT-PCR的方法,观察各组胫骨形态学变化,及胫骨中ET-1、NGF、TGF-β1表达的变化,以及各组脊髓中SP、CGRP、P38MAPK、GFAP表达的变化。 结果:1.本研究成功制备了大鼠胫骨骨癌痛模型,并从疼痛行为学、CT影像学以及组织形态学等方面得以证实。 2.乳腺术后骨转方在造模早期即可改善模型大鼠的体重下降情况,且可以提高模型大鼠的热痛敏阈值,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。乳腺术后骨转方各剂量组可以在一定程度上减轻模型大鼠的骨质破坏情况,抑制破骨细胞的活化和增殖,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。 3.乳腺术后骨转方各剂量组均可降低模型大鼠胫骨中ET-1、NGF、TGF-β1的表达,与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。 4.乳腺术后骨转方的各剂量组均可下调大鼠脊髓中SP、CGRP、P38MAPK、GFAP的表达(P<0.05)。与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。 结论:1.成功建立了walker256大鼠胫骨骨癌痛模型; 2.乳腺术后骨转方可以抑制骨癌痛大鼠体重的下降,提高模型大鼠的热痛敏阈值,减轻热痛反应;同时乳腺术后骨转方可以在一定程度上减轻肿瘤对骨的破坏作用,抑制破骨细胞增殖。且乳腺术后方联合唑来膦酸可以早期干预模型大鼠体重下降的情况,并可延长减轻热痛敏反应的作用时间。 3.乳腺术后骨转方可能通过抑制模型大鼠外周细胞因子ET-1、NGF、TGF-β1的表达,降低模型大鼠的外周敏化反应,发挥减轻骨癌痛的作用。 4.乳腺术后骨转方可能通过抑制P38MAPK通路,减少脊髓中星形胶质细胞的活化,下调脊髓中SP、CGRP的含量,降低模型大鼠的中枢敏化反应,从而发挥减轻骨癌痛的作用。