赭曲霉毒素A的快速可视化检测及适配体与毒素分子的相互作用研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:happyyoung
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在本次研究中,我们建立了一个快速可视化检测赭曲霉毒素A(OTA)的体系。研究是基于未改性纳米金的变色效应和适配体的特异性识别作用。在此次实验中适配体是包含36个碱基的单链DNA,它可以附着在纳米金粒子的表面。纳米金粒子表面吸附上适配体以后就不会在高盐环境中聚集到一起,而裸露的纳米金粒子则会在高盐环境中聚集。由于纳米金具有变色效应,稳定的纳米金胶体溶液呈现酒红色。随着纳米金粒子的聚集,纳米金溶液的颜色会逐渐发生变化,逐渐变为紫色最后会呈现出蓝色。基于以上实验原理建立了 OTA检测体系,线性范围是32 ng·mL-1~1024ng·mL-1,最低检测限低至20ng·mL-1,并且成功地测定出白葡萄酒中的OTA的浓度。实验也证实了该体系有着较好的灵敏度和选择性。为进一步在分子水平研究适配体与OTA的特异性结合,实验中我们利用SYBYL软件探究适配体和小分子结合的相互作用。首先利用SYBYL软件进行小分子和适配体的分子对接,并利用软件中的打分函数对每一次对接打分。选择出打分函数较好的结构,记录这些结构的活性中心,然后利用GeneDoc软件分析活性中心的碱基序列。根据分析的结果,我们重新设计出一系列的碱基序列。针对每一种碱基序列,分别用SYBYL软件对接模拟,从中选出三条打分值较好的碱基序列。对选出的每一条碱基链进行荧光标记,荧光标记后使用微量热泳动仪测定碱基链的Kd值,考察每一条碱基链与OTA结合的能力。通过测定碱基链的Kd值就可以比较出碱基链与适配体的亲和能力。研究发现所合成的三条碱基链中有一条具有结合OTA的能力。本论文通过赭曲霉毒素A的快速可视化检测及适配体与毒素分子的相互作用研究,建立了基于适配体的快速检测方法,并使用分子模拟手段初步实现了对检测机理的预测。
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