古菌 pfu是一种耐热古菌,常作为模式生物用于研究。核苷酸切除修复是一种修复DNA连续错误的DNA修复系统。为了研究核苷酸切除修复相关的XPB,Bax1两个蛋白的性质,本文克隆了相关蛋白的基因,包括 pfuXPB,pfuBax1,pfuPCNA, pfuRPA,并在大肠杆菌中进行重组表达,几个蛋白都成功表达。经过镍柱纯化,离子交换树脂以及凝胶过滤纯化等三步蛋白纯化步骤,得到了这些蛋白的可溶形式,研究了XPB,Bax1的酶学性质。探讨了XPB,Bax1参与核苷酸切除修复的可能作用机制。得到如下结果。　　PfuXPB是人XPB的同源蛋白,能够结合DNA,具有ATP酶活性,且它可以和pfuBax1结合形成异源二聚体,形成二聚体后,他们结合DNA的能力会增强,同时pfuXPB的ATP酶活力也得到增强。作为人XPB的同源蛋白,本文并未检测到 pfuXPB的解旋酶活性。 pfuBax1是一种古菌中特有的蛋白,它与pfuXPB在同一个操纵子序列中,两种蛋白能互相结合,发生影响。pfuBax1与pfuXPB结合后能激发pfuBax1的核酸酶活性,使它可以切割小泡DNA底物。复合物切割小泡DNA底物需要特定二价金属离子的存在,二价金属离子的变化会影响XPB/Bax1的切割模式,比如本文中镁离子和锰离子条件下他们的切割模式就发生了改变。其中,在镁离子条件下只能切割小泡DNA底物,但是在锰离子条件下不仅能够切割小泡DNA底物,而且能切割单链DNA结构。　　为了探究XPB/Bax1切割模式,本文尝试了不同结构的DNA作为底物,分析并猜想了XPB/Bax1可能的切割模式。　　同时,本文还做了PCNA、RPA以及双链结合蛋白 histone对XPB/Bax1的切割模式是否有影响,结果表明 RPA和histone对XPB/Bax1切割模式没有显著影响,但是 pfuPCNA对切割模式有着显著影响。通过进一步的突变实验,我们猜测并验证了PCNA影响切割模式的原理。