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目的:阐明转录因子Pokemon抑制ER-α泛素化降解的机制,为ER-α阳性乳腺癌的治疗提供新的思路。方法:以体外培养的ER-α阳性乳腺癌细胞MCF-7、T47D及ER-α阴性乳腺癌细胞MD-MBA-231、MD-MBA-468、Hs-578T为实验对象,通过qRT-PCR及Western blot技术检测ER-α阳性及ER-α阴性乳腺癌细胞系中Pokemon的mRNA和蛋白表达水平。瞬时转染siRNA降低MCF-7及T47D细胞中Pokemon的表达,同时检测ER-αmRNA及蛋白水平的表达情况。为了进一步探索Pokemon调控ER-α的具体机制,通过放线菌酮示踪试验分析Pokemon对ER-α蛋白水平半衰期的影响;同时向瞬时转染siRNA Pokemon的MCF-7、T47D细胞中加入蛋白酶体抑制剂MG132,初步判断Pokemon降低ER-α稳定性是否通过蛋白酶体途径。此外,通过免疫共沉淀实验证实:Pokemon是否通过泛素化途径调控ER-α的降解。最后,我们运用qRT-PCR及Western blot技术筛选Pokemon调控ER-α泛素降解过程中起关键作用的E3链接酶。结果:1.通过qRT-PCR及Western blot技术证明转录因子Pokemon表达与ER-α呈正相关,沉默Pokemon能抑制MCF-7、T47D细胞中ER-α的mRNA及蛋白表达水平。2.放线菌酮示踪实验表明沉默Pokemon的MCF-7、T47D细胞中ER-α降解的半衰期明显缩短;用蛋白酶体抑制剂MG132处理沉默Pokemon的MCF-7、T47D细胞可以挽救ER-α蛋白的降解。3.通过免疫共沉淀技术在293T细胞中观察到沉默Pokemon可显著增加ER-α的泛素化修饰水平。4.抑制Pokemon的MCF-7、T47D细胞中关键E3泛素连接酶TRIM25的mRNA及蛋白水平的表达增加。结论:1.Pokemon可以调控ER-α蛋白质的稳定性,其机制可能与抑制ER-α通过泛素化蛋白酶体途径降解有关。2.TRIM25可能是Pokemon调控ER-α泛素化降解的关键E3连接酶。