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目的:本课题从自由基、分子生物学、基因水平等多个层次探讨自然衰老小鼠皮肤组织中mtDNA片段缺失及线粒体T-ATP酶活性改变以及黄芪提取液对这些改变的干预作用,进一步探讨中药黄芪提取液抗氧化损伤的效果及延缓衰老的机制,为中药美容保健品及中药天然化妆品的开发提供科学依据。
材料与方法:选用健康昆明种小鼠共计72只,雌雄各半。其中3月龄小鼠12只作为青年对照组(A),其余60只为17月龄的老龄小鼠,将这些老龄小鼠再随机分为5组,每组12只,即老龄空白对照组(B)、黄芪低剂量组(C)、黄芪中剂量组(D)、黄芪高剂量组(E)和维生素EC组(F)。在自然环境下,按性别及组别分12笼喂养(每笼6只),常规饲食饮水。其中A组和B组灌胃生理盐水(20ml/kg);C组、D组、E组分别灌胃黄芪提取液4g/kg、8g/kg、16g/kg;F组灌胃维生素EC混悬液3mg/kg,每日灌胃1次,连续操作30天。30天后用电镜观察小鼠皮肤组织超微结构的改变,以生化分析方法测定皮肤组织中超氧化物岐化酶(SOD)活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、羟脯氨酸(HYP)含量、线粒体总ATP酶活性,运用PCR法测定皮肤组织中mtDNA片段缺失情况。
结果:与青年对照组相比较,老龄空白对照组(P<0.01)、黄芪低剂量组(P<0.01)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.05)小鼠皮肤组织中SOD活性均明显降低;老龄空白对照组(P<0.01)、黄芪低剂量组(P<0.05)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.05)羟脯氨酸含量均减少;老龄空白对照组(P<0.01)、黄芪低剂量组(P<0.01)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.05)MDA含量均显著增高;老龄空白对照组(P<0.01)、黄芪低剂量组(P<0.01)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.01)线粒体ATP酶活性均明显降低。与老龄空白对照组比较,黄芪低剂量组(P<0.05)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.01)均可提高SOD活性;黄芪低剂量组(P<0.05)、黄芪中剂量组(P<0.05)、黄芪高剂量组(P<0.05)、维生素EC组(P<0.05)均可提高羟脯氨酸的含量;黄芪低剂量组(P<0.01)、黄芪中剂量组(P<0.01)、黄芪高剂量组(P<0.01)、维生素EC组(P<0.01)均可减少MDA含量;黄芪低剂量组(P<0.05)、黄芪中剂量组(P<0.05)、黄芪高剂量组(P<0.05)、维生素EC组(P<0.01)均可提高皮肤组织中线粒体ATP酶活性。运用PCR法检测皮肤组织中mtDNA片段缺失程度,从电泳结果及mtDNA缺失型/mtDNA野生型的光密度比值结果来看,与青年对照组比较,老龄空白对照组(P<0.01)和黄芪中剂量组(P<0.05)小鼠皮肤组织中mtDNA(3867bp)片段缺失明显;与老龄空白对照组比较,黄芪中剂量组(P<0.01)小鼠皮肤组织中mtDNA(3867bp)片段缺失的光密度比值显著减少。
结论:自然衰老小鼠的皮肤组织中有明显的氧化损伤,胶原蛋白减少,存在mtDNA片段缺失,线粒体ATP酶活性明显降低。中药黄芪可通过清除自由基,提高皮肤中羟脯氨酸的含量及线粒体ATP酶活性,提高线粒体呼吸功能,减少mtDNA片段缺失的形成,促进成纤维细胞合成胶原,提高机体抗氧化能力,从而发挥延缓衰老的作用。